荧光素酶与荧光素在特定条件下发生反应。反应过程需Mg²⁺ 等金属离子作为辅助因子参与。其发光强度和ATP浓度存在一定对应关系。可通过专业仪器检测生物发光的强度数值。这种检测的灵敏度极高能检测到微量ATP。能在短时间内得出较为准确的ATP测定结果。测定体系中的pH值会影响反应的进行程度。 温度对荧光素酶生物发光
测定生物组织中ATP的含量,常常利用“荧光素—荧光素酶生物发光法”。该方法的主要步骤如下:①将所测生物组织研磨后沸水浴10分钟,然后冷却至室温;②离心处理后取一定量的上清液放人分光光度计(测定发光强度的仪器)反应室内,并加人适量的荧光素和荧光素酶,在适宜条件下进行反应,③记录发光强度并计算ATp含量。分析上述...
荧光素酶-荧光素法测定ATP: 取肝组织0.1~0.15g,加入1mL腺苷酸提取液中,匀浆后沸水中加热3min,然后以4000rcf/min离心3min,取上清液0.4mL,检测时将肝匀浆液0.1mL加入重蒸水0.1mL稀释,置入2mL的比色杯中,放入FG-200型发光光度计的暗室中,从暗室盖的小孔中快速注入荧光素酶系缓冲液0.8mL,所记录之发光曲线的初始...
可利用“荧光素—荧光素酶生物发光法”测定生物组织中ATP的含量,主要过程如下:①将所测生物组织研磨后沸水浴10分钟,然后冷却至室温;②离心处理后,取一定量的上清液放入分光
本发明公开一种测定萤火虫荧光素酶活性的方法,通过建立化学发光反应体系和偶联酶反应体系,将萤火虫荧光素酶催化底物荧光素的反应中产生的无机焦磷酸盐(PPi)积累转化为7‑甲基‑6‑硫代鸟嘌呤(7‑methyl‑6‑thioguanosine,MTGua),并利用该物质在360nm处产生最大光吸收的特性,提供了一种通过监测反应体系光...
荧光素酶-荧光素法测定ATP: 取肝组织0.1~0.15g,加入1mL腺苷酸提取液中,匀浆后沸水中加热3min,然后以4000rcf/min离心3min,取上清液0.4mL,检测时将肝匀浆液0.1mL加入重蒸水0.1mL稀释,置入2mL的比色杯中,放入FG-200型发光光度计的暗室中,从暗室盖的小孔中快速注入荧光素酶系缓冲液0.8mL,所记录之发光曲线的初始...
荧光素酶在ATP的参与下,可使荧光素发出荧光.可利用“荧光素-荧光素酶发光法”来测定样品中ATP的含量.某研究小组对“测定ATP时,所需荧光素酶溶液的最佳
双荧光素酶报告基因测定法 一、引言 双荧光素酶（Dual-Luciferase）报告基因测定法是一种常用的非侵入性转录物分析方法，广泛应用于研究基因表达调控、信号传导途径和转录因子激活等生物学过程。双荧光素酶测定法结合了荧光素酶的双荧光素酶报告基因和育像蛋白的内参基因，通过检测这两种酶的活性比例来分析目标基因的...
以下是双荧光素酶报告测定法的一般步骤: 1.构建表达双荧光素酶的质粒:在质粒中克隆想要研究的基因的启动子区域(或者其他感兴趣的区域),并将双荧光素酶基因放在该启动子区域下游,形成表达双荧光素酶的质粒。 2.转染质粒:将构建好的质粒转染到目标细胞中,使其表达双荧光素酶。
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