并构建包含EGFPP2A序列的重组载体;通过显微注射将cas9mRNA,gRNA和重组质粒注射到斑马鱼受精卵的动物极中;在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达情况,筛选得到纯合周细胞表达绿色荧光的斑马鱼敲入模型.该斑马鱼敲入模型可以在活体斑马鱼示踪cd248a基因的时空表达模式和表达水平,也可以直接观察分析斑马鱼血管周细胞的发育变化,对...
采用PCR方法,改造肌球蛋白轻链2启动子,使其适合定向插入红色荧光蛋白载体的多克隆位点,构建成肌肉特异性表达的红色荧光载体.通过显微注射,将线性化的表达载体注入斑马鱼的受精卵,获得了转红色荧光蛋白基因的斑马鱼.红色荧光蛋白在胚胎期开始表达,随着鱼体的生长,表达量有增加的趋势,至仔鱼出膜时,大部分的躯干部被...
1.肌细胞特异表达mCherry荧光蛋白斑马鱼家系构建方法,其特征在于包括以下步骤: 1)采用PCR方法,从斑马鱼基因组中得到肌球蛋白轻链2基因的启动区序列; 2)利用pCS2-mCherry质粒和pminiTol2空载体,构建pminiTol2-Mlc2f-mCherry质粒; 3)通过对斑马鱼胚胎进行显微注射的方法,构建肌细胞特异表达mCherry荧光蛋白斑马 鱼家系...
目的]本研究旨在构建一种对17α-炔雌醇(17α-ethynylestradiol,EE2)敏感的荧光转基因斑马鱼模型,提供一种可直观地监测水中环境雌激素(environmental estrogens,EEs)污染程度的生物检测方法.[方法]构建Tg(ere-vtg:egfp)质粒,显微注射到1-2个细胞期的斑马鱼胚胎中,经10 ng/L EE2暴露发出绿色荧光,建立能稳定遗传的Tg...
利用血管特异性EGFP转基因斑马鱼可以成功实现在96孔板或者384孔板中进行抗血管新药或者新药靶点的体内高通量和高内涵筛选。 Fig5. Screening and evaluation of anti-tumor or anti-angiogenic drugs. 例如: 贝伐单抗/Bevacizumab(商品名-阿瓦斯汀/Awastin),2017年销售额71.41亿美元),由罗氏/基因泰克公司最先研发成功,...
环境雌激素严重危害人类的健康.为了简便直观地检测水环境中的雌激素污染,构建了一种转基因斑马鱼,在这种鱼的体内,利用卵黄蛋白原1(vitellogenin1,vtg1)的启动子调控报告基因绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorescentprotein,EGFP)的表达.用1ng/L的17!-炔雌醇(17'-ethynylestradiol,EE2)诱导4天后,仔鱼肝脏中出现绿色荧光....
为获得能在肌肉表达绿色荧光蛋白的转基因斑马鱼(Brachydaniorerio),采用PCR方法,从斑马鱼基因组DNA中分离了肌球蛋白轻链2启动子,序列分析表明,该启动子与国外文献报道的斑马鱼肌球蛋白轻链2启动子序列的相似性为98.6%。将改造后的启动子插入绿色荧光蛋白基因载体,构建成肌肉特异性表达载体。通过显微注射,将线性化的表达载...
专利摘要:本发明属于基因工程技术领域,具体涉及一种荧光标记周细胞斑马鱼模型的构建方法与应用。本发明利用CRISPRCas9基因编辑技术合成cd248a基因打靶位点gRNA;根据斑马鱼cd248a基因的起始密码子上下游序列设计同源臂,并构建包含EGFP‑P2A序列的重组载体;通过显微注射将cas9mRNA、gRNA和重组质粒注射到斑马鱼受精卵的动物极...
肌细胞特异表达mCherry荧光蛋白斑马鱼家系构建方法,属于转基因领域,涉及斑马鱼.采用PCR方法,从斑马鱼基因组中得到肌球蛋白轻链2基因的启动区序列;利用pCS2-mCherry质粒和pminiTol2空载体,构建pminiTol2-Mlc2f-mCherry质粒;通过对斑马鱼胚胎进行显微注射的方法,构建肌细胞特异表达mCherry荧光蛋白斑马鱼家系.选用一种新的...