DCFH-DA荧光探针法是目前广泛用于检测细胞内ROS的方法。DCFH-DA(二氯荧光黄双乙酸盐)是一种可指示的探针,本身不具有荧光,但可以自由穿过细胞膜。一旦进入细胞,它会被细胞内的酯酶水解成DCFH。由于DCFH无法穿过细胞膜,因此荧光探针会在细胞内积聚。细胞内的ROS能够氧化无荧光的DCFH,生成有荧光的DCF,且荧光强度与ROS水...
目前,实时荧光定量PCR技术主要通过两种方式——荧光染料或者荧光标记的探针对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,并结合相应的软件对产物进行分析,计算待测样品模板的初始浓度。 01 一、荧光染料法 在PCR反应体系中,加入过量荧光染料,该染料只与双链DNA小沟结合,...
qPCR(实时荧光定量PCR)是一种强大的分子生物学技术,通过检测PCR反应过程中的荧光信号来定量分析DNA。荧光检测方法主要有两种:荧光染料嵌合法和荧光探针法。 荧光染料嵌合法 🌈 荧光染料嵌合法利用荧光染料与双链DNA的非特异性结合来发出荧光。随着PCR循环的进行,荧光强度呈指数增长。通过监测荧光信号,可以实时追踪DNA的...
众所周知,目前主流的实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR)方法分为染料法和探针法,染料法以SYBR Green法为代表,SYBR Green染料游离时荧光微弱,但但一旦与双链DNA结合后,荧光大大增强,反应管中的荧光强度与反应管中双链DNA的数量成正比例关系,因此可以通过检测荧光计算反应管中产生的双链DNA(PCR产物)的量,...
荧光探针法是探针法是当探针结合到目标序列上以后,聚合酶降解探针后,探针上自带的荧光基团离开淬灭基团,从而发出荧光。荧光探针分类很多,可以根据材料属性分为有机和无机探针。 荧光探针是指在紫外-可见-近红外区有特征荧光,并且其 荧光性质(激发和发射波长、 强度、寿命、 偏振等)可随所处环境的性质,如极性、折射...
在PCR反应体系中加入荧光化学物质,利用荧光信号积累实时定量检测致病病原体基因核酸,该技术为实时荧光定量PCR(简称qPCR)。它比化学发光、时间分辨、蛋白芯片等免疫学方法更具独到优势。 根据所用荧光化学物质的不同,qPCR可分为荧光染料法(SYBR Green Ⅰ 法为代表)...
荧光探针法PCR试剂盒是一种基于聚合酶链式反应(PCR)技术,结合荧光探针法的分子生物学检测工具。它在动物疾病防控中起到了至关重要的作用,特别是在快速、准确地检测病原体方面,为动物健康和公共卫生安全提供了有力支持。 一、原理 荧光探针法PCR试剂盒采用的是一种双探针PCR技术。其原理是在PCR扩增的过程中,加入一...
根据荧光信号的量化结果,可以计算出目标序列在样本中的数量。 总之,PCR荧光探针法通过PCR反应扩增目标序列,并通过荧光信号来判断目标序列的存在和数量。该方法具有高灵敏度、高特异性和实时监测的特点,被广泛应用于基因检测、病原体鉴定和遗传疾病诊断等领域。
刚接触荧光定量PCR方法——TaqMan探针法时,不少人会有这样的疑问:为什么检测结果看不到熔解曲线?其实,熔解曲线是为了判断产物是否有非特异性扩增的一个侧面依据,适用于荧光染料法,但不适用于探针法。 一、QPCR原理 实时荧光定量PCR(QPCR)是通过在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号的变化实时监测PCR扩增反应中每...