PCR 扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR 扩增时,Taq 酶的 5'-3’ 外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每...
所需仪器与耗材有: LightCycler® 480 全自动实时定量 PCR 仪以及配 套使用的 96 或 384 多孔板,透明封板膜等一次性耗材。朗基T30 PCR 仪、rainin单道移液器、Nunc 冰盒及NEST 盒装吸头等。 实验操作流程: 1.用新鲜提取的 RNA 反转 录合成 cDNA 第一链,然后进行实时荧光定量 PCR,其中包括:SYBR Green 反...
标准品是自己制备的所以浓度已知用标准品去进行pcr扩增在电脑上会出现一荧光扩增曲线荧光扩增曲线的横坐标是ct值纵坐标是荧光信号的积累量不同浓度的标准品可根据图读出它的ct值比如下图中绿色的线是标准品的话ct值就是和荧光阈值交点所对应的横坐标由此可以根据标准品的ct值和浓度做出一条标准曲线并计算出标准曲线...
实时荧光定量PCR(RT-qPCR) 原理 在PCR反应体系中加入荧光基因,利用荧光信号累计实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。 特点 检测仪器少,只用一台仪器。 检测时间短,只须45分钟～1小时10分钟(试剂各异),而定性PCR须3～4小时,酶免终点定量须6～8小时,荧光终点定量须2～3小时。
扩增效率（E）=10-1/斜率(理想的PCR扩增效率=2)百分比表示为：e%=(E-1)×100% 同时是上面例子，...
摘要:为建立鸭坦布苏病毒(duck tembusu virus,DTMUV)荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测方法,对DTMUV的NS5基因设计特异性引物和MGB探针,使用RT-PCR扩增NS5基因并将其连接到pEASY®-T1载体上构建重组质粒,提取阳性重组质粒作为qRT-PCR阳性模板绘制...
在RNA定量研究(绝对或相对定量)中或验证PCR(delta-delta-Ct)的扩增效率时,对于每个基因都应当制备标准曲线。标准曲线数据点应当覆盖您的目标基因期望丰度。额外的数据点也可以包括在内,例如在极限上下方的最小及最大RNA量等,以帮助区分特异性和非特异性产物。
关于实时荧光定量PCR (qPCR) 检测试剂 关于序列检测试剂 SYBR Green I染料试剂 关于定量检测 绝对与相对定量 用于相对定量的标准曲线法 用于相对定量的比较CT法 用于绝对定量的标准曲线法 下载该网页的 PDF 版本: 实时荧光定量 PCR (qPCR) 的要素 乾坤白金系列qPCR预混液热销中>> ...
(4)反应体系中有PCR反应抑制物:一般是加入模板时所引入,应先把模板适度稀释,再加入反应体系中,减少抑制物的影响。 10、溶解曲线不止一个主峰 (1)引物设计不够优化:应避免引物二聚体和非特异性扩增出现。 (2)同源性比较高:被检测基因在待检测样品有同源性较高的序列。