荧光定量PCR(Quantitative Real-timePCR,qPCR)是一种在PCR扩增反应体系中加入荧光基团,对扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。 2.荧光定量PCR的原理 qPCR所使用的荧光化学可分为两种:荧光探针和荧光染料。而qPCR的...
实时荧光定量PCR（quantitative PCR，qPCR）是一种用于实时监测PCR反应进度的技术。同时，可以定量相对少量的PCR产物（DNA、cDNA 或 RNA）。qPCR基于对报告分子产生的荧光的检测，随着反应的进行，报告分子产生的荧光会增加。qPCR也称为Real-Time PCR，但需要注意的是，Real-Time PCR不应该被缩写成RT-PCR，RT-PCR指代...
两步RT-qPCR与一步RT-qPCR的区别两步RT-qPCR首先在一管中使用反转录酶将RNA反转录成cDNA，通常选用随机引物、oligo dT或基因特异性引物进行反转录。完成反转录后，吸取约10%左右的cDNA用于后续荧光定量PCR。两步法RT-qPCR的优点 cDNA量充足：反转录后产生的cDNA可选择通过稀释或者直接使用的方式满足多次实时荧光定量...
RT-QPCR 基本原理和概念 实时荧光定量PCR(Real-time Quantitative PCR)是一种在DNA扩增反应中,以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。通过在PCR反应体系中加入荧光染料(SYBR Green)或荧光标记的特异性的探针,与DNA产物特异性结合,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可...
qPCR是一种选择性扩增和定量检测DNA或互补DNA（cDNA）区域的技术。位于感兴趣区域两侧的寡核苷酸引物用于...
QPCR(Quantitative PCR,定量PCR)是一种利用PCR(Polymerase Chain Reaction,聚合酶链反应)技术来定量检测DNA样品中某个特定基因的表达量的方法。它是PCR技术的一种应用,通过放大DNA片段并测定荧光素信号的强度,可以准确地计算出目标基因的表达量。相比于传统的PCR技术,QPCR可以检测到更低浓度的DNA,并且具有更高的准确性...
实时定量PCR也被称为实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR, qPCR)，是一种在DNA扩增反应中加入荧光基团，以荧光信号积累实时监测每次PCR循环后产物总量，进而对待测样品中的目的序列进行定量分析的方法。基本原理 在学习实时定量PCR数据处理之前，我们首先需要了解一下它的数学原理，Ct值为什么是我们数据处理过程中...
荧光定量PCR实验因为灵敏度高所以经常是差之毫厘谬以千里，所以在实验过程中，我们需要注意诸多细节，谨慎操作。小伙伴们看到这里就要着急了，我怎样才能做好qPCR实验，拿到实验结果，发表高分文章？在进行荧光定量实验时，我们通常会接触并使用三种图表，分别是扩增曲线、标准曲线还有熔解曲线。曲线中出现的图形分别代表着...
上下游引物之间也不能存在互补序列，引物之间互补会产生引物二聚体而降低PCR效率甚至影响定量准确性。如果引物二聚体及发夹结构不可避免，应尽量使其△G值不要过高（应小于4.5kcal/mol）。8. 引物扩增的是目标特异产物。qPCR检测最终目的是了解目的基因的丰度，如果出现非特异扩增，定量会不准确。所以设计好引物后，...