一. RT-qPCR 基本原理和概念实时荧光定量PCR (Quantitative Real-time PCR)是一种在DNA扩增反应中,以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。 以cDNA 为模板进行 PCR,在 PCR 扩增过程中,通过收集荧光信号,对 PCR进程进行实时...
在PCR 反应体系中,加入过量 SYBR 荧光染料,SYBR 荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后,发射荧光信号,而不掺入链中的 SYBR 染料分子不会发射任何荧光信号,从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。 RT-QPCR操作流程 1)样本处理 植物组织:以叶片 RNA 提取为例。取新鲜叶片在液氮中充分研磨或将叶片剪碎后...
什么是实时荧光定量PCR (RT-PCR,qPCR)? 实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)指的是在PCR进行的同时,对其过程进行监测的能力(即实时)。因此,数据可在PCR扩增过程中,而非PCR结束之后,进行收集。这为基于PCR的DNA和RNA定量方法带来了革命性的变革。在实时荧光定量PCR (qPCR)中,反应以循环中首次检测到目标扩...
(4) 产物分析：通过琼脂糖凝胶电泳(RT-PCR)或荧光信号 (RT-qPCR)分析扩增效果。此外，一种将 RT-...
实时荧光定量 PCR,简称 RT-QPCR, 属于 Q-PCR 的一种,目前该技术已得 到广泛应用,如:扩增特异性分析、基因定量分析、基因分型、SNP 分析等。荧 光定量 PCR 最常用的方法是 DNA 结合染料 SYBR GreenⅠ的非特异性方法和 Taqman 水解探针的特异性方法。
而荧光探针法如TaqMan技术，检测特异性强，灵敏度高，适合进行多重qPCR检测，但需要根据不同的序列合成不...
产品名称 RT-qPCR探针试剂盒(一步法多重荧光定量PCR)|Hieff Unicon® V Universal Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit 产品规格 100T 用途范围 仅做科研,不用于临床 是否进口 否 加工定制 否 商品货号 11213ES 商品规格 100T 生产厂家 翌圣生物科技(上海)股份有限公司 规格编码 11213ES60 最小...
一步法RT-qPCR的缺点二聚体风险增加：上下游基因特异性引物在42℃-50℃下更易发生二聚体聚合，从而导致非特异扩增；检测靶标数少：单一RNA模板能够检测的靶标数量相对较少。以上是对不同荧光定量PCR方法的介绍，相信小伙伴们通过小翌的介绍，对如何选择适合自己的荧光定量PCR方法已经有一定的了解啦。
RT-qPCR既需要使用高质量 RNA 作为起始材料,也需要将 RNA 转化为 DNA 拷贝,以实现准确的实时荧光定量 PCR 检测 (qPCR)。增加 RNA 定量步骤后,您将能够更好地优化 qPCR 分析。 单击以下选项卡,了解有关优化工作流程中每个步骤的更多信息。 RNA 纯化