设计qPCR引物时,通常要留意以下几点:引物尽量要跨内含子设计、产物长度100~300 bp、Tm值尽量接近60℃且上下游引物尽量接近、引物末端最好是G或C等等。 1.引物跨内含子设计 在设计qPCR引物时,选择跨内含子设计的引物可以使gDNA模板不能得到扩增,产物均来源于cDNA的扩增,这样也就去除了gDNA污染造成的影响。 2.引物...
该方法在qPCR定量检测mRNA水平中最常见,研究生理变化对基因表达水平的影响。比如研究不同光照强度对毛竹Lhca基因表达量的影响,就可以使用相对定量方法来研究。 相对定量需要确保实验样本与对照样本的靶基因从等量原料中得到。Ct值与起始样品模板量的浓度相关,但是两组样品间浓度能否调至完全相同呢?这就要求样品细胞起始数...
4815 -- 1:02:42 App 荧光定量PCR从入门到精通 1.3万 10 4:38 App 实时荧光定量PCR 数据处理 2.6万 138 4:58 App 【荧光定量PCR(qPCR)】实验操作详解及数据处理(2- ΔΔCt法)附运算表格模板 11.9万 673 1:31:32 App 实时荧光定量PCR原理与分析方法 8万 260 7:16 App 实时荧光定量PCR | qRT...
近期有读者反映不能每天准时收到我们的推送,原因在于微信公众号平台改变了推送方式。为了避免类似情况,请为“科研人直通车”设置星标,文章点一下“在看”,保持互动热度,就能及时收到每期推送啦! RT-qPCR实验原理、步骤及注意事项 原理 RT-PCR就是实时检测PCR每个循环扩增产物相对的荧光信号,来实现对起始模板进行定量...
本期文章,我们将围绕MIQE标准,对qPCR实验过程中的“获取样本”、“核酸提取”2个步骤展开。 一、样本的获取与选择 在选择不同样本时,我们首先要保证样本新鲜性。若采样完无法及时进行实验(如户外采样),则需要对样本进行保存。 常规的保存方法就是液氮保存或者-80℃保存,更要避免反复冻融。目前市面也有很多试剂耗材...