或者就需要制作标准曲线,制作标准曲线,可以将基因片段克隆到质粒,然后体外转录成rna,定量以后合成cdna,然后按比例稀释后做出标准曲线,或者可以采用一个一直质量好的rna样品,如细胞株,然后以此为标准制作.如果直接采用dna做标准,那前提是rna逆转录的效率一致.
荧光定量pcr，用GAPDH作相对定量时候，标准曲线如何做，用bio-rad cfx manager软件。。。可否发我步骤。
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这怎么还越稀释浓度越大呢？再说你稀释倍数太小了，如果手法还不够好的话扩增曲线很容易出现重合现象，建议至少以五倍浓度稀释，这是最下限，保守点的可以8被、10被浓度稀释。至于扩增效率是不用你计算的，机器直接会在标准曲线给出的同时给你算出决定系数还有扩增效率。一般大于80%小于120%为宜。
你要是想做梯度稀释的cDNA样品的标准曲线,这个容易,但我建议你买个EasyDilution,Takara有卖,这个有助于你在稀释样品时不会因粘在枪头上而带来过多的误差.操作如下:1、准备直接反转录的cDNA样品8ul;2、转移到另一新离心管中再加8ulEasyDilution,混均;3、从2中再取8ul放到另一管中,再加8ulEasyDilution,混均...
这个应该是你的模板没稀释准确，或者浓度不合适，如果是数据不成直线，全还是很平滑的曲线，可以勉强用曲线处理。如果不平滑，R方值很小，恐怕结果不太可靠了，只得重做，如果不能重做，只能舍弃不好的数据，用另几个数据得到方程，算出结果，但结果的可靠性就差了，只能对付一下。
采用相对法定量要求必须目的基因和内参具有相同的扩增效率,所以需要做efficiency curve如果得到的斜率小于0.1,可以采用相对法,否则,需要重新设计能达到相同扩增效率的引物,或者就需要制作标准曲线,制作标准曲线,可以将基因片段克隆到质粒,然后体外转录成rna,定量以后合成cdna,然后按比例稀释后做出标准曲线,或者可以采用一个一...
你要是想做梯度稀释的cDNA样品的标准曲线,这个容易,但我建议你买个EasyDilution,Takara有卖,这个有助于你在稀释样品时不会因粘在枪头上而带来过多的误差.操作如下:1、准备直接反转录的cDNA样品8ul;2、转移到另一新离心管中再加8ulEasyDilution,混均;3、从2中再取8ul放到另一管中,再加8ulEasyDilution,混均...
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