茎环RT-PCR可用于其他小RNA分子,如短干扰RNA(siRNAs)的量化。此外,为更好的特异性和效率,茎环RT引物设计的概念可以应用在小分子RNA克隆和多重检测。 引言: miRNA是自然发生的,高度保守的转录家庭,来源于较大的发夹前体。miRNA是在动物和植物的基因组上发现的。到目前为止,有1000个独特的转录产物,其中,在桑格...
苹果MicroRNA的茎环RT-PCR检测及离体试管苗与田间苗表达差异
我最近在摸索做microRNA的茎环法定量RT-PCR,PCR结束之后对结果进行8%PAGE电泳，发现有很多的非特异性条...
请问有没有哪位大侠做过microRNA 茎环RT-PCR，pcr的结果应该是一个什么样的条带，急求！！！
这种方法可以确保快速,准确,灵敏miRNA表达谱,并能识别和监控特定组织或疾病的潜在生物标志物。茎环RT-PCR可用于其他小RNA分子,如短干扰RNA(siRNAs)的量化。此外,为更好的特异性和效率,茎环RT引物设计的概念可以应用在小分子RNA克隆和多重检测。 引言: miRNA是自然发生的,高度保守的转录家庭,来源于较大的发夹前体...
对于整体miRNA谱有一个敏感的、特异地增加需求。有效高调的miRNA的能力可能会导致miRNA的生物标志物疾病或组织特异性的发现,以及有助于理解miRNA如何调节干细胞分化。我们的茎环RT-PCR方法,可以为这些研究提供了一个切实可行的解决办法。我们目前正在开发多重办法,要进一步提高这种方法的效用。
microRNA的实时定量茎环RT-PCR技术 摘要: 已开发出一种新型的microRNA(miRNA)的定量方法,即利用茎环反转录,Taqman PCR分析。茎环RT引物在RT 效率和特异性方面比传统的更好。TaqMan miRNA的检测是很具体的,可以检测成熟miRNA和区分相关的甚至低至一个核苷酸的miRNAs。此外,他们不会受到基因组DNA污染的影响。精确量化...
结果表明,RT反应中是否添加5纳克人类基因组DNA对CT值没有影响,表明RNA的目标(数据未显示)检测是非常特异的。基于这一观察,我们直接miRNA定量检测中增加了热处理细胞。图5显示了使用纯化总RNA,细胞裂解物,从同样数目的HepG2细胞得到的热处理细胞的miRNA进行定量比较。直接添加热处理细胞的miRNA的检测CT值最低,和其他...