脾脏细胞分离 首先先了解脾脏的结构,脾脏分为红髓和白髓。遍布着大量的淋巴细胞,脾脏外周有一层包膜 对于小鼠来说,颈椎脱臼致死小鼠,泡在75%酒精中,放在细胞间传递仓开紫外进行杀菌,半小时以上 拿到超净工作台进行解剖,最好是拿几个小针管固定住小鼠四肢及皮肤,小心剥离脾脏,置于培养皿中,加入商品化试剂盒中的液体,或者直接加入1640,然后放在目
在使用RPMI 1640培养基时，通常需要搭配血清或无血清添加物，以提供更好的细胞生长环境。RPMI 1640培养基采用碳酸氢钠缓冲系统，因此需要5-10% CO2环境来维持生理pH值，确保细胞生长和繁殖的稳定性。
(一)细胞的原代培养 1.取材: 取小白鼠一只,采用断头法处死;清水洗小鼠并浸于75%酒精中灭菌3分钟。取出转入超净洁净台内的解剖盘内,无菌操作打开腹腔。取出脾脏,去除其周围的脂肪组织,镊起脾脏用PBS液自上而下冲洗1—2次。转入无菌玻璃培养皿中,待用。 2.分离脾细胞: 用滴管先向上述无菌玻璃培养皿中滴入PBS...
脾细胞培养 一、试验器皿 1. 刻度吸管(5ml1支) 2. 滴管(5个) 3. 试管(10ml5个) 4. 塞子,盖子(包括:00/0号试管塞两个;青霉素瓶塞两个;2号盐水瓶塞一个;对应培养瓶盖一个) 5. 培养瓶(一个,大/中/小依情况而定) 6. EP管(1.5ml、500ul各一个) ...
11.如果要立即使用细胞,则去除上清后,并通过轻轻吹打将细胞沉淀重悬于细胞培养基中,就可以用于基于细胞的免疫测定,如ELISpot、FluoroSpot和流式细胞术。如果需要冻存细胞,则进入下一步。 脾细胞的冻存 材料 •冷冻培养基:RPMI 1640(含 2 mM L-谷氨酰胺),+ 20%FCS和10%DMSO。如果细胞使用的是无血清培养基,...
1.在培养皿中加入PBS,再用“L”型针头注射器在皿中吸取PBS液0.2ml,然后将其沿脾长轴方向注射入脾内(使脾脏膨胀以利于细胞散开)。 2.用针尖在脾脏上扎眼,并用“L”针头轻刮脾脏表面挤出脾细胞,用滴管吸皿中的PBS液冲脾脏并吹散刮出的脾细胞,稍倾斜并静置1-2分钟。 3.吸取上述静置后的脾细胞悬液上清部分...
HYPERLINK\l"_Toc256000011"3.培养脾细胞: 5 HYPERLINK\l"_Toc256000012"(二)细胞死活鉴定及计数 6 HYPERLINK\l"_Toc256000013"2.染色计数: 6 HYPERLINK\l"_Toc256000014"10x10。染色后活细胞不着色,死细胞显示蓝色。注意染色时 6 HYPERLINK\l"_Toc256000015"3.计数: 6 HYPERLINK\l"_Toc256000016"4.计算细胞活...
提起胃,找到后面条状的脾,用弯头镊子取出脾,将周围的脂肪组织去除。PBS缓冲液清洗1-2次待用。 在无菌培养皿内加入PBS缓冲液30滴,用L型针头吸取PBS0.2mL注入小鼠脾脏,用针头在脾脏上戳几个小孔,顺脾脏轻轻刮,从小孔挤出分散的细胞。 将培养皿倾斜,使大块组织充分沉淀,吸取分散的细胞悬液2mL,1000r/min离心5min...
1.细胞的原代培养 1.1断头法处死小鼠,将血放掉洗净,在酒精中浸泡3min消毒。 1.2在超净工作台无菌操作,将小鼠背朝下放在解剖板上,用镊子提起腹部皮肤,剪开。沿开口向两侧斜着剪开,翻起皮肤露出腹腔,即可看到白色的胃。提起胃,找到后面条状的脾,用弯头镊子取出脾,将周围的脂肪组织去除。PBS缓冲液清洗1-2次待用。
1、实验六 小鼠脾细胞培养【实验目的】1.了解原代细胞培养的基本方法及操作过程。2.学习细胞计数、营养液的配制等,初步掌握无菌操作方法。【实验原理】(一) 细胞原代培养原代细胞培养是指直接从动物体内获取的细胞、组织和器官,经体外培养后,直到第一次传代为止。这种培养,首先用无菌操作的方法,从动物体内取出所需的...