脾细胞是ELISpot和FluoroSpot测定中使用最多的细胞,至少对小鼠和大鼠样本而言是如此。脾细胞可以很容易地从脾脏中分离出来,而不需要Ficoll分离。细胞可以在分离后直接使用,也可以冷冻保存,并在以后批量使用。 下面是编译自mabtech.com/knowledge-h的关于如何最好地(i)分离、(ii)冻存和(iii)复苏脾细胞的详细
脾脏细胞分离 首先先了解脾脏的结构,脾脏分为红髓和白髓。遍布着大量的淋巴细胞,脾脏外周有一层包膜 对于小鼠来说,颈椎脱臼致死小鼠,泡在75%酒精中,放在细胞间传递仓开紫外进行杀菌,半小时以上 拿到超净工作台进行解剖,最好是拿几个小针管固定住小鼠四肢及皮肤,小心剥离脾脏,置于培养皿中,加入商品化试剂盒中的液体...
小鼠脾细胞的分离原理基本上可分为以下几个步骤: 1.选择性切除脾脏:将小鼠固定在手术台上,进行全麻手术,使用消毒的手术刀仔细切开腹部皮肤,暴露脾脏。根据需要,将脾脏切除并置于冷盐水或试管中。 2.细胞解聚:将脾脏置于含有细胞解聚酶(例如胰蛋白酶)的消化液中,用温和的消化条件进行消化。消化时间和消化液浓度可根...
(完整word)脾淋巴细胞分离小鼠脾脏单个核细胞的分离 一、实验目的 1。熟悉细胞分离的基本原理 2。掌握小鼠脾脏单个核细胞的分离的方法 3。掌握流式细胞术检测细胞表面标志的方法 二、实验原理 1.台盼蓝染色:正常的活细胞,胞膜结构完整,能够排斥台盼蓝,使之不能够进入胞内。丧失活性或细胞膜不完整的细胞,胞膜的...
一、脾细胞分离 所需材料包括：脾脏、培养皿、无菌操作台、离心机、PBS缓冲液等。步骤如下：准备无菌操作台，取出脾脏。用无菌剪刀剪开脾脏，将其浸入PBS缓冲液中。在无菌条件下，使用移液器将脾脏碎成小块。将碎脾放入培养皿中，用玻璃棒轻轻搅拌，使细胞分散。通过离心分离，将细胞与碎片分离。使用...
脾细胞分离纯化是一种重要的细胞分离技术，其分离出的细胞在体外培养后可以用于多种实验和研究。在进行脾细胞的分离纯化时，先加不完全培养基可以去除多余的非细胞成分，如浮游细胞和死亡细胞等。这样可以减少对细胞的不利影响和混杂污染，保证细胞的健康性和纯度。然后再加完全培养基，提供全部的必需营养物...
脾单核细胞分离实验操作方法: 采用颈椎脱臼法处死小鼠,于75%的酒精中浸泡10-15min;在无菌超净台内分离脾脏,放入PBS溶液(按照1:50的比例加入双抗)中清洗2遍;将清洗后的脾脏组织转移至离心管中,加入适量的RMPI-1640培养基,用剪刀将其剪碎成糜状;将剪碎后的组织经200目的滤网过滤,得到脾细胞悬液;另取一个离心...
脾细胞分离 红细胞裂解液配制1. 小鼠脾细胞的制备: Balb/c 小鼠摘眼球放血,处死,75%浸泡消毒 2~3min ↓ 超净台内解剖、取脾,剪碎 ↓于 200 目筛网中研磨过筛,小平皿收集(小皿放约 5ml 20%血清的 1640) ↓ 移至离心管中,800rpm,离心 5min,弃上清 ↓ 加入 5ml 红细胞裂解液,吹打均匀,静置 3～4...
如果是做单抗的饲养层细胞或者做细胞融合用，可以简单点，无菌剪开腹腔，镊子剪刀取脾，放入到有少许培养...
1、不完全的细胞释放：在脾脏细胞分离过程中，若细胞释放不完全，会导致计数结果偏小。确保使用合适的细胞分离方法和消化酶，充分释放细胞。2、细胞凝固或聚集：在细胞分离的过程中，细胞会发生凝固或聚集，导致计数的困难。在细胞分离后，可以通过使用细胞分散剂或机械强制分散的方法来解决此问题，确保细胞...