（7） 如果载体和宿主菌适合蓝白斑筛选的话，滴完菌液后再在平板上滴加40μl 2% X-gal，8μl 20% IPTG，用酒精灯烧过的玻璃涂布棒涂布均匀。（8） 在涂好的培养皿上做上标记，先放置在37℃恒温培养箱中30-60min直到表面的液体都渗透到培养基里后，再倒置过来放入37℃恒温培养箱过夜。（9） 在被细菌污...
这步需要耐心,时间不足会导致转化效率降低。 3.热激处理:42℃水浴热激90秒,立即放回冰上冷却2分钟。温度和时间必须精准,温度过高会杀死细菌,时间过短DNA无法进入细胞。 4.复苏培养:加入900μL无抗生素的LB液体培养基,37℃摇床200rpm培养45分钟。这一步让细菌恢复状态,同时表达抗性基因。 5.涂布平板:取100μL...
三、细菌转化实验操作步骤：（1）预先将恒温水浴的温度调节至42°C。（2）从-70°C超低温冰箱中取一管（100μl）合格细菌，立即用手指加热使其融化，然后将其插入冰，冰浴中5-10min。（3）加入5μl连接的质粒混合物（DNA含量不超过100ng），轻轻摇动并置于冰上20分钟。（4）轻轻摇动后，插入42°C水浴中1-...
步骤1.将4-5 mL LB液体培养基(注意,此LB液体培养基不是第一日使用的LB琼脂)和2-2.5 μL的Zeocin(此处以Zeocin为例,应根据DNA质粒的耐药性更换对应抗生素)按照1:1000或1:2000的比例加入细菌培养管中。 步骤2.每个培养皿最好用移液枪枪头选择3个菌落,分别放入3个培养管中。 步骤3.松开盖子用胶带松动地固...
步骤一:准备实验所需材料 在进行酵母菌表面展示的细菌转化前,首先需要准备一些实验所需的材料。这些材料包括: 1.适量的目标酵母菌细胞 2.合适的质粒DNA(含有目标分子编码序列) 3.细菌菌液 4.细菌培养基 5.选择性培养基 步骤二:细菌转化 1.制备电击转化所需细菌细胞 取一小块选择性培养基平板,用细菌菌丝线头在...
细菌转化实验来自步骤如下: 1、事先将恒温水浴的温度调到42℃。 2、从-70℃超孙数低温冰柜中取出一管100μL感受态菌,立即用手指加则念首温融化后插入冰上,冰浴5到10min。 3、加入5μL连接好的质粒混合液 DNA含量不超过100ng,轻轻震荡些后放置冰上20 min往境象。 4、轻轻摇匀后插快业企坏约朝鸡同飞战...
细菌转化过程大致可分为三个步骤:基因构建、转化及检测。 首先,基因构建是将外源基因插入到适当的载体中,以便将它们引入到细菌中。在这一步骤中,必须提前准备好新基因,并将其与在载体中已有的基因结合起来,以便将其传递到细菌中。这一步骤可以使用多种技术,如PCR法、DNA合成法、DNA克隆法等。 其次,转化是将构建...
使用合适的无菌技术,吸取20到200微升菌液加到LB琼脂板上,用细菌涂棒将其均匀涂在平板上。在37度温度下将LB平板倒置培养过夜,这样可以防止冷凝水污染细菌。 第二天,被质粒转化过的细菌将会形成菌落。 接下来,计数菌落数目来计算转化效率,它是成功转化菌落的数目除以总DNA的量得到的数值。
方法/步骤 1 首先，由-80摄氏度冰箱中保存的菌落划单菌落，过夜培养大约16-20小时，将新鲜的单菌落接种于5ml的SOB培养基的试管中，在37摄氏度180r/min震荡培养过夜。2 然后，取培养物500微升转接入含50mlSOB培养基的500ml摇瓶中，在200r/min37摄氏度下振荡培养至OD600约为0.5，将细菌培养物置于冰水混合物中...
细菌转化实验步骤细菌转化: 1.将质粒和感受态细胞从冰箱中取出,放入冰上 2.在无菌操作台中,将质粒1微升加入到感受态菌20-30微升中(不要用手捂菌,手也不要碰到EP管盖) 3.冰上30min,每隔5min轻摇EP管 4.将混合液在42℃中热激90s,将质粒粘附在感受态细胞表面,立即冰上静置1min 5.加入200微升LB培养基,...