通过病毒载体(如慢病毒或腺相关病毒)将shRNA序列导入细胞,实现长期稳定的基因敲低。 基因编辑技术 ✂️ 如CRISPR/Cas13系统,可以特异性地切割目标RNA,实现基因的敲低。在实际操作中,需要根据实验目的和细胞类型选择合适的方法。例如,对于需要长期稳定敲低的情况,可以选择病毒载体介导的shRNA表达;而对于短期实验,合...
1)提前一天在6 cm培养皿中铺HEK-293T细胞,保证第二天密度可达70%左右。 2)准备相应数量的高压后的Ep管,加入慢病毒包装质粒4 μg(PSA 3μg +PMD2G 1μg)、4 μg测序正确的质粒和200 mL Opti-MEM混匀(单个质粒),再加入24 μL PEI,轻轻混匀,室温静置10 min。 3)将提前一天铺好的293T细胞换液,换...
1、搞清基因调控思路 本次直播将从基础入手,带你理清基因调控课题的思路,从目标基因找寻到细胞水平调控,再到动物实验验证,最后回归临床,0 基础也能 get 基因调控的「玩法」。 (以肿瘤研究为例,调控目标基因) 2、选对基因调控工具 目的基因功能机制研究时,常见的方式是敲减、过表达、突变,可构建相应载体或基因编辑...
基因敲低目的设计并筛选对足细胞血栓素A2受体(Tbxa2r)基因表达敲低效果最佳的siRNA序列。方法培养永生性小鼠足细胞(MPC5),取生长占培养板70%细胞用于实验。设计4条siRNA序列(Tbxa2r-mus-1150、Tbxa2r-mus-1309、Tbxa2r-mus-1677、Tbxa2r-mus-1884),经转染效率验证后转染足细胞。将细胞分为四组:干扰组(以筛选...
尽管有许多方法可以将基因传递到细胞,但研究人员目前使用三种高度认可的方法:化学试剂,电穿孔(基因电转)和病毒转导。最终目标是将核酸输送到细胞中,通过外源基因的表达或通过敲低内源基因来研究基因功能。基因表达的操纵是药物开发、癌症研究、基因治疗和组织工程等研究领域的核心技术。图1.转染真核细胞的化学转染1)...
1、搞清基因调控思路 本次直播将从基础入手,带你理清基因调控课题的思路,从目标基因找寻到细胞水平调控,再到动物实验验证,最后回归临床,0 基础也能 get 基因调控的「玩法」。 (以肿瘤研究为例,调控目标基因) 2、选对基因调控工具 目的基因功能机制研究时,常见的方式是敲减、过表达、突变,可构建相应载体或基因编辑...
通过细胞凋亡实验证实了过表达GRP37可以抑制食管鳞癌细胞的凋亡能力,得出过表达GPR37增强放射敏感性;然后建立稳定敲低GPR37食管鳞癌细胞系,通过细胞凋亡实验证实敲低GRP37促进食管鳞癌细胞凋亡能力,得出敲低GPR37抑制放射敏感性.因此本发明提供了构建GPR37过表达及敲低的方法,以及为食管鳞癌患者个体化治疗及实施更加有效...
巨噬细胞系的构建方法:将含有sgRNA的重组慢病毒转染猪肺泡巨噬细胞,经抗性筛选得到所述TLR4基因敲低的猪肺泡巨噬细胞系;所述sgRNA由SEQ ID NO.1～2所示核苷酸序列退火得到.本发明构建的敲低TLR4基因猪肺泡巨噬细胞系可以促进口蹄疫病毒复制,与未敲低的细胞系相比,该敲低TLR4基因猪肺泡巨噬细胞系中口蹄疫病毒复制...
巨噬细胞系的构建方法:将含有sgRNA的重组慢病毒转染猪肺泡巨噬细胞,经抗性筛选得到所述TLR4基因敲低的猪肺泡巨噬细胞系;所述sgRNA由SEQ ID NO.1～2所示核苷酸序列退火得到.本发明构建的敲低TLR4基因猪肺泡巨噬细胞系可以促进口蹄疫病毒复制,与未敲低的细胞系相比,该敲低TLR4基因猪肺泡巨噬细胞系中口蹄疫病毒复制...