细胞培养流程及注意事项用移液管或者巴氏吸管吸取培养液加入pbs轻轻摇晃培养瓶培养皿数次冲洗细胞然后吸取丢弃pbs加入胰酶消化轻轻摇晃培养瓶培养皿数次使胰酶与细胞表面充分接触放到37孵育23min加入含血清完全培养基终止消化用移液器吸取瓶内液体轻轻冲洗容器表面使细胞流入容器底部重复23次将细胞悬液移到离心管中800rpm...
注意不要过多,确保组织块切面贴在培养瓶底壁上。 培养:将培养瓶翻转,使瓶底朝上,在种植了组织块一侧的对侧面加足培养液,避免组织块与培养液接触,然后塞紧瓶塞。将种植了组织块的一侧朝上,静置于37℃培养箱中。待组织块贴壁1到3小时后翻瓶,使贴壁的组织块浸没在培养液中,继续静置。 换液:每隔2到3天更换一...
1)细胞密度超过80%即可进行传代,拿出细胞,弃去旧培养液; 2)用PBS冲洗细胞2-3次(动作要轻柔,清洗时可摇晃培养瓶以保证清洗效果); 3)弃去废液,向培养瓶中加入事先预热好的胰蛋白酶(用量要足以覆盖细胞层),轻轻晃动培养瓶以利于消化; 4)1min左右后在显微镜下观察细胞,当90%细胞被消化下来时,向培养瓶中加入2-...
注意事项: 1.保持无菌环境:细胞培养需要在无菌环境下进行,防止培养基和细胞被细菌、真菌等污染。 2.确保细胞的纯度:细胞培养需要保证细胞的纯度,避免异质性细胞或细胞株的混淆。 3.控制培养环境:细胞培养需要控制培养环境,包括温度、湿度、氧气和二氧化碳等,以确保细胞的正常生长和分裂。 4.定期更换培养基:培养基中...
五、其他注意事项 1.培养基的配制要做好梯度摸索并详细记录,否则细胞都不知道是怎么死的。 2.细胞房不能进去太多人,避免相互干扰。 3.尽量提高操作熟练度,减少培养皿在培养箱外的滞留时间,细胞很脆弱,经不起折腾。 4.把握好培养基更换的时间,不同细胞类型时间不同,早了浪费试剂,晚了可能全军覆没。
三、培养流程 1. 细胞复苏 1)用酒精棉球擦拭生物安全柜台面,准备好所需耗材,紫外30min,与此同时打开37℃恒温水浴箱对所用试剂进行温浴,同时也为复苏细胞做准备; 2)按照RPIM-1640+10%FBS+1% P/S的比例配制完全培养基,吹打混匀后按10倍细胞的体积(严格来讲是10倍细胞的体积,实际操作中适当减少用量对细胞并无...
细胞房使用流程及细胞培养注意事项流程 热度: 一、准备工作 准备工作对开展细胞培养异常重要,工作量也较大,应给予足够的重视,准备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行。准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒,培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌,无菌室或超净台的清洁与消毒,培养箱及其他仪器的检查与...
1. 选择处于对数生长期、生长状态良好的细胞进行冻存。 2. 消化收集细胞,离心后用冻存液重悬细胞,并分装到冻存管中。 3. 将冻存管放入程序降温盒中,按照一定的降温速率降至 -80℃,然后转移至液氮中长期保存。 三、贴壁细胞培养注意事项 (一)无菌操作 ...
将培养基通过0.22 μm的过滤器过滤灭菌,避免细菌和真菌污染。 1.4 储存 将配制好的培养基分装到无菌的试管中,贴上标签并存放于4℃冷藏。 2. 实验中步骤 2.1 实验材料准备 培养基:DMEM(添加10%胎牛血清和1%青霉素-链霉素)。 试剂:0.15%胰蛋白酶(用于消化细胞),PBS(磷酸盐缓冲液)。