TritonX-100可溶解细胞膜脂质,使抗体能够穿透至细胞内抗原。对于核内蛋白检测,建议缩短通透时间至5分钟,避免细胞结构过度破坏。通透结束后用PBS洗涤三次,每次5分钟。 封闭非特异性结合是减少背景信号的关键步骤。加入含5%BSA的封闭液,室温封闭1小时。BSA浓度可根据抗体效价调整,高背景时可提升至10%。封闭过程中保持...
咱们以培养在细胞爬片上的贴壁细胞为例,需要提前准备好预冷的PBS缓冲液、4%多聚甲醛固定液、0.5%TritonX-100透化液,实验前半小时从4℃冰箱取出封闭用的山羊血清室温回温。 细胞固定环节容易被新手忽视时间把控,建议使用预冷的多聚甲醛在室温固定15分钟足够,时间过长会导致细胞膜过度交联影响抗体穿透。固定后切记用...
细胞爬片免疫荧光实验的步骤如下：第一天：1. 使用PBS溶液对培养板中已爬附好细胞的玻片进行三次洗涤，每次3分钟；2. 用4%的多聚甲醛对爬片进行固定，持续15分钟，随后用PBS溶液对玻片进行三次洗涤，每次3分钟；3. 若细胞膜上表达的目标抗原不是辣根过氧化物酶（HRP），则用0.5%的Triton X-100（...
细胞免疫荧光tritonx-100用什么稀释?网友 1 最佳答案 回答者:网友 PBS稀释。当然最好用封闭液直接稀释,再加一点Trit轮财onX100效果好。 培养液成分太多了。而且固定之后细胞都死了,用培据一减燃军十告罗息接持养液没什么意义,只要保证其pH等条件适合就好了。 抗体说明书上都会有推荐的稀释倍数。上网查一下,...
接着，将细胞爬片置于0.2%的Triton X-100溶液中通透10分钟，随后用PBS清洗三次，以增强抗体的穿透力。然后，用与二抗相同宿主的血清封闭30分钟，再进行三次用PBS的清洗，这一步有助于减少非特异性结合。一抗处理通常在4度的湿盒中过夜，或者在37度下持续2小时，根据实验效果选择。清洗步骤同样是三次...
7.吸出0.5%TritonX-100,每孔加入1-2mlPBS,漂洗5min/次*3次; 8.吸出PBS,每孔加入1ml 2%BSA(PBS稀释),室温下封闭30min-1h; 9.吸出2%BSA,勿洗; 10.每个盖玻片上滴加50ul左右一抗(一抗稀释比例根据说明书,用2%BSA稀释),置于4度过夜; 11.次日取出六孔板,每孔加入1-2mlPBS,漂洗5min/次*3次; 12....
1、细胞在盖片上生长融合到95%-100%时,从孵箱中取出。 2、用预温的1×PBS洗3次,每次10分钟 3、4%的甲醛室温固定20-30分钟 4、1×PBS洗3次,每次10分钟 5、0.2%Triton X-100透化2-5分钟 6、1×PBS洗3次,每次10分钟 7、5%BSA室温封闭30分钟 8、加一抗(用1%BSA稀释)放在湿盒里,4度过夜 9、1×...
PBS稀释。当然最好用封闭液直接稀释，再加一点TritonX100效果好。 培养液成分太多了。而且固定之后细胞都死了，用培养液没什么意义，只要保证其pH等条件适合就好了。 抗体说明书上都会有推荐的稀释倍数。上网查一下，有很多protocol。
2. 固定:冷4%PFA固定30min,后1XPBS清洗3次,每次5min。(备注:4%PFA(多聚甲醛)最好现配现用,最好不要超过1周,PFA提前放置4℃冰箱预冷) 3. 透膜:0.2%TritonX-100(1xPBS 配)透膜 15 min,PBS 洗三遍,每次 5 min。(备注:看你的一抗是否定位细胞内,若是则需此步骤) 4. 封闭:5% GS(GS:山羊血...
首先，将细胞爬片小心放置于35mm或60mm的细胞培养皿中，用PBS缓冲液清洗三次，以去除残留的细胞培养基或其他杂质。如果细胞爬片较小，操作时需要格外小心，以免损坏。接着，使用4%的多聚甲醛固定细胞20分钟，然后用PBS清洗三次，以确保固定效果。随后，使用0.2%的Triton X 100进行细胞通透处理，持续10...