1. 确保选用合适的载体:在进行稳转细胞系筛选前,需要仔细选择合适的转染载体,选择适合自己实验的载体,并充分了解其特性和对细胞的影响。 2. 确认转染方法:选择合适的转染方法,例如化学转染、电穿孔法、病毒载体等,在考虑到细胞种类和转染效率的前提下选择最适合的转染方法。 3. 优化转染条件:转染条件包括细胞密度、...
全自动药筛细胞系统 臻合智造“全自动细胞药物筛选系统”, 整合了iXCells干细胞系列产品、TECAN自动化工作站、实验室智能物联服务平台,为客户提供细胞药物筛选自动化整体解决方案,建立了细胞供应、存储、培养、筛选的全自动化体系。通过“云+智能端”的一站式服务模式,实现不同类型资产的全生命周期闭环、高效、精准...
很多真核表达质粒上都有两个抗性基因,但一般其中只有一个抗性可以用来筛细胞。其中氨苄青霉素对细胞是没有筛选作用的,这是用于构建克隆时筛选细菌的。所以这种情况下只能用G418。细胞转染后用G418来加压筛选,其原因是在载体上具有新霉素的抗性基因,当载体被转染入细胞后,由于细胞拥有了抗新霉素的特性,因此在用新霉素...
在细胞融合过程中,重要的一点是要将杂交瘤细胞从骨髓瘤细胞和脾细胞中筛选出来以提高抗体产量。 脾细胞不能在培养条件下增殖因此可以很容易地被筛除。 骨髓瘤细胞则相对困难,一般利用含次黄嘌呤 (hypoxanthine,H)、氨基蝶呤(aminopterin,A)和胸腺 嘧啶核苷酸(thymid...
以下将系统阐述稳转细胞系筛选的标准流程及关键控制点。 一、 1.载体选择:优先选用包含筛选标记(如嘌呤霉素抗性基因、新霉素抗性基因)及目的基因表达单元的慢病毒或质粒载体。对于需要长期观察的基因功能研究,建议使用带有荧光标签(如GFP、mCherry)的双顺反子载体。 2.细胞系验证:确认目标细胞的增殖特性与转染效率。
筛选稳定细胞系的方法主要有两种：一是质粒转染后通过单克隆筛选，这种方法虽然基础但效率相对较低；二是通过慢病毒感染，这是更为便捷和高效的选择，已成为主流技术。慢病毒能够感染各类细胞，并在细胞内稳定整合和长期表达，因此常用于制备特异性强的稳定细胞株，便于后续的实验如Co-IP或Pull-Down，以及...
筛选稳定细胞系的方法有两种：一种是转染质粒后，通过单克隆方法筛选，另一种是慢病毒感染筛选。慢病毒感染方法相比质粒转染更便捷高效，成为当前主流筛选稳定细胞系的方法。慢病毒可以感染所有种类的细胞，且感染后可整合至细胞基因组，实现长期稳定的表达，从而用于制备稳定表达或沉默特定基因的单克隆细胞株...
1.单克隆后细胞生活习性改变:考虑质粒的表达对细胞的生长有一定的影响,查文献确 认一下。 2.单克隆后的培养需要多加些血清,再传代时保证板子不影响细胞贴壁,避免出现传代 后细胞浮起来后死亡的现象。 3.筛选成单克隆后,不加药培养2代,再加药继续筛选两代,此时如果不出现死亡细胞 则可以认为是稳定细胞系。复苏...
CHO-M1 和 CHO-K1 细胞系:CHO-M1 和亲本 CHO-K1 细胞种在 CloneMedia CHO(K8710)培养基中,每孔 1000 个细胞,37℃培养 8-10 天直到离散克隆形成。新传代的细胞和前几代的细胞分别种在培养基中,观察 M1 GPCR 的不同表达水平。 直接标记的方法:PE 标记的 CHRM1 抗体随细胞直接加到半固体培养基中。对...
G418的筛选过程是稳定表达细胞系的一部分。经过瞬时转染或电穿孔后,与转染物质中的DNA共染色板并内化进入细胞。在内化过程中,染色体或质粒DNA可以在总体上被细胞机制视为异物并准备将其解除。其中的一个解除机制是通过解除转录RNA,从而将它们从蛋白质生产途径中移除。G418抑制暴露在表面的核糖体中的修饰基队的蛋白质的...