稳转细胞系构建,基于某一细胞系构建持续过表达或者干扰某特定基因的细胞系。 外源基因在细胞中的表达可分为两大类,一类是瞬时表达,一类是稳定表达(永久表达)。 前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中,虽然可以达到高水平的表达,但通常只持续几天。后者外源DNA整合到宿主细胞染色体上,使宿主细胞可长期表达目的基因。 慢病毒是一种RNA
一、稳转细胞系的原理 稳转细胞系的构建基于基因工程和分子生物学两个学科的技术手段,通过将外源DNA克隆到具有某种抗性的载体上,载体被转染到宿主细胞并整合到宿主染色体中,用载体中所含的抗性标志进行筛选混合阳性克隆(针对转染效率较高的细胞株),最终使得外源DNA能够在细胞分裂过程中被稳定地遗传和表达。 这一过程涉...
以上步骤为构建多克隆稳转细胞系流程,若需构建单克隆稳转细胞株,则还需进行以下步骤: ① 对筛选后的多克隆稳转细胞株进行流式分选,即分选出单克隆细胞; ② 单细胞经过增殖后,继续进行第二轮筛选; ③ 筛选完成后,收集部分细胞进行mRNA水平检测,选择结果正确的单克隆细胞冻存保种。 慢病毒介导的稳定细胞株构建优点 ...
过表达稳转细胞系,是指通过将外源基因整合到细胞中,使其在细胞中过表达和稳定表达的一种细胞系。稳转细胞系构建对基因功能、蛋白质表达、药物筛选等领域至关重要;有助于解析基因功能、调控机制及疾病关联,并在…
稳转株即稳定表达细胞株,指的是基于某一细胞系构建的持续过表达或干扰某特定基因的细胞系。慢病毒感染-药物筛选法是目前广泛应用的稳转株构建方法,具有高效整合、目标细胞广泛等特点。 将外源DNA克隆到具有某种抗性的载体上,载体被转染到宿主细胞并整合到宿主染色体中,用载体中所含的抗性标志进行筛选。最常用的真核表...
慢病毒系统慢病毒构建稳转细胞系是目前最常规的稳转株构建方法，可以介导shRNA,过表达，CrispR，报告基因等等基因转导的需求，一般情况下经过1-2周的筛选，细胞即可实现稳转。建议初代建立好的细胞系大量冻存，后续实验培养尽量控制代数，且定期加入对应抗性做压力筛选，保持导入基因表达的稳定性。如果您做的是shRNA干扰...
慢病毒构建稳转细胞系是目前最常规的稳转株构建方法,可以介导shRNA,过表达,CrispR,报告基因等等基因转导的需求,一般情况下经过1-2周的筛选,细胞即可实现稳转。建议初代建立好的细胞系大量冻存,后续实验培养尽量控制代数,且定期加入对应抗性做压力筛选,保持导入基因表达的稳定性。如果您做的是shRNA干扰细胞系,需要特别注...
慢病毒构建稳转细胞系是目前最常规的稳转株构建方法,可以介导shRNA,过表达,CrispR,报告基因等等基因转导的需求,一般情况下经过1-2周的筛选,细胞即可实现稳转。建议初代建立好的细胞系大量冻存,后续实验培养尽量控制代数,且定期加入对应抗性做压力筛选,保持导入基因表达的稳定性。如果您做的是shRNA干扰细胞系,需要特别注...
🔬 构建稳转细胞系是科研中的一项关键技术,目前常用的病毒载体包括γ逆转录病毒、慢病毒和腺病毒等。其中,γ逆转录病毒和慢病毒因其能够将基因组RNA逆转录为DNA并整合到宿主基因组中的特性,特别适合用于构建稳转细胞系。🔬 慢病毒稳转细胞系的构建步骤如下:1...
稳转细胞系包括多克隆稳转细胞系(即抗性基因筛选得到的细胞株)和单克隆稳转细胞株(从多克隆细胞中经细胞克隆挑选后,由一个细胞扩增得到的细胞系)。 多克隆稳转细胞系构建一般通过慢病毒感染来完成。慢病毒载体由转移质粒、包装质粒和包膜质粒组成,转移质粒携带目的基因和选择标记(如嘌呤霉素抗性基因),包装质粒提供病毒复...