稳转细胞株是什么?稳转株即稳定表达细胞株,指的是基于某一细胞系构建的持续过表达或干扰某特定基因的...
因为通过构建稳定株,可以大大降低频繁转染或者病毒包装的成本,这也极大方便实验研究;部分蛋白半衰期极长,瞬时RNA只能干扰表达,却无法去除已表达的目的蛋白,这种情况通过构建稳转细胞株可以实现更好的基因干扰效果;需要用诱导表达系统的,主要是一些致死基因或者是需要时空表达的;若是需要用细胞做动物实验的,比如裸鼠...
稳转细胞系是相对瞬时转染而言的。瞬时转染的表达时间短暂,外源基因导入整合基因组的几率非常低,绝大部分...
在筛选得到的稳转细胞株中,目的基因通常会随机整合到细胞基因组的染色体上。随着细胞的分裂,目的基因会稳定地遗传给子代细胞,从而实现目的基因在细胞中的稳定表达。但也有可能会出现目的基因沉默或表达水平不稳定的情况,这可能与基因整合位点的染色质状态、细胞环境等因素有关,需要进一步优化培养条件或筛选更多的细胞...
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稳转细胞株构建即稳定表达的细胞株,是指基于某一细胞系构建的持续过表达或干扰某特定基因的细胞系。通过将外源DNA/shRNA片段克隆到某种含有抗性基因的特定载体上,重组载体感染宿主细胞后被整合到其染色体上,随着细胞增殖而稳定表达和传递,最后用抗性筛选即可得到稳转细胞株。
稳转细胞株可以稳定传15代,稳转细胞株由于基因是通过病毒载体随机插入到目的细胞的基因组中,所有并不是稳定的拷贝数也不是均匀的分布,可以在后续的细胞传代中,拷贝数会不断稀释,导致基因表达量逐步的下降,特别是在传代超过15代之后,更是如此,此事加药物也不一定能够稳定表达,所以稳转细胞株可以稳定传15代。
稳转株即稳定表达的细胞株,指基于某一细胞系构建的持续过表达或干扰某特定基因的细胞系。为什么要建立稳转株?①通过建立稳转细胞系,可以降低频繁转染或者病毒包装的成本,方便在目的细胞中研究基因功能实验研究;② 区别于瞬时转染只能干扰表达,无法去除已表达的目的蛋白,构建稳转细胞系可以实现更好的基因干扰效果;③...
稳转细胞株是指在细胞中稳定表达特定基因或外源 DNA 的细胞系。其构建原理主要涉及目的基因的导入、筛选和稳定整合等过程,以下是具体介绍: 目的基因的获取与载体构建 目的基因获取:从生物细胞中提取基因组 DNA 或总 RNA,通过 PCR 扩增或 RT - PCR 等方法获得目的基因片段。也可以通过人工合成的方法获得目的基因。