常见的富集方法包括IMAC(金属离子亲和层析)、TiO2(钛离子亲和层析)、MOAC(磷酸酯酶结合富集)等。其中,IMAC是最常用的富集方法之一,它利用金属离子与磷酸基团之间的亲和力使得磷酸化肽段与非磷酸化肽段分离。TiO2富集方法则利用钛离子与磷酸基团之间的亲和力分离磷酸化肽段。MOAC则利用磷酸酯酶结合具有磷酸化基团的肽段,...
亲和色谱富集磷酸化肽段的过程主要涉及3个步骤 (图1B):(1) 孵育:磷酸化蛋白质/肽段上带负电的磷酸基团与金属离子或者金属氧化物结合;(2) 清洗:除去结合的非磷酸化肽段;(3) 洗脱:释放与金属材料结合的磷酸化肽段。 图1磷酸化肽段富集策略 A:磷酸化肽段富集方法;B:基于亲和色谱的磷酸化肽段富集方法的主要...
MOAC 方法建立约 10 年,利用氧化金属可以和磷酸根基团中的氧结合的特性进行磷酸化肽段的富集。氧化钛(TiOx)是最常用的 MOAC 试剂, 此外 Fe3O4 也比较常见。 IMAC 和 MOAC 方法都可以对磷酸化肽段或者蛋白质进行富集,二者都容易受到酸性肽段影响,比如多羧基集团的肽段会发生非特异性结合。IMAC 所得样品容易含有...
在其上络合金属离子形成磷酸识别功能分子.将磷酸识别功能分子与羧基化的金刚烷铵共价结合,得到具有富集基团的客体分子.将葫芦脲共价修饰于硅球表面,得到主体分子功能化材料.最后利用主体材料在溶液中捕获客体分子来实现磷酸化肽段和蛋白质的富集.该新型磷酸识别功能分子能够在中性缓冲体系下实现对N磷酸化肽段和蛋白质的...
到目前为止,基于抗体的酪氨酸磷酸化蛋白质富集策略是唯一行之有效的手段,但是该方法存在特异性差、重现性低、价格昂贵等缺点。SH2是生物体用于识别酪氨酸磷酸化的结构域,但是天然的SH2亲和力弱,不能有效富集酪氨酸磷酸肽。李顺成此前通过突变结合区的三个残基建立SH2超亲体,该SH2突变体与酪氨酸磷酸肽的亲和力...
根据本发明的另一方面,提供了一种磷酸化肽段检测和定量的方法,该方法包括采用上述任一种磷酸化肽段富集的方法进行磷酸化肽段富集,然后采用液质联用检测系统对磷酸化肽段进行单组分深度覆盖检测。 进一步地,单组分深度覆盖检测中一级质谱采用高分辨轨道离子阱orbitrap方式进行检测,二级质谱采用普通离子阱iontrap模式扫描。
本发明公开了一种磷酸化肽段富集装置与方法。所述装置包括可拆卸配合的分离柱、以及收集管;包括两端开口的套管,所述套管由上至下具加样部、反相色谱填料部、和滤液排出部;所述反相色谱填料部有用于固相萃取的反相色谱填料;所述收集管,为与离心机配合的容器,其上端开口与所述分离柱配合,侧方具有开孔,用于平衡内外气...
本发明属于无机材料和生化分析技术领域,具体为一种采用具有核壳结构的金属氧化物磁性微球分离富集磷酸化肽段的方法.本发明将上述磁性微球作为微吸附剂直接加入含有痕量磷酸化肽段混合溶液中,在一定条件下进行富集.操作简便,无需离心,避免了离心过程造成的"共沉淀效应"及传统固定金属离子亲和材料的"孔洞效应",且具有更...
通过Fe‑IMAC材料一次富集，再经两次洗脱，第一次采用20％乙腈0.3％乙酸的酸性洗脱液洗脱出单磷酸化肽段，第二次采用100mM磷酸氢二钾碱性洗脱液洗脱出多磷酸化肽段，即可实现单磷酸化肽段与多磷酸化肽段的高效分离，从而实现精确鉴定，提升样本的磷酸化修饰位点鉴定覆盖度，简便高效、成本低，适于工业化应用。
本发明属于无机材料和生化分析技术领域,具体为一种采用具有核壳结构的金属氧化物磁性微球分离富集磷酸化肽段的方法。本发明将上述磁性微球作为微吸附剂直接加入含有痕量磷酸化肽段混合溶液中,在一定条件下进行富集。操作简便,无需离心,避免了离心过程造成的“共沉淀效应”及传统固定金属离子亲和材料的“孔洞效应”,且具有...