细胞复苏后,生长一段时间,95%的细胞贴壁生长,细胞状态良好,说明细胞复苏成功。 瞬转步骤 以Lipofectamine 转染试剂为例的操作流程,不同转染试剂参考说明书 1. 将复苏后常规培养的细胞按照 1-3x105 接种到 6 孔板中,加入 2-4mL 的完全培养基,混匀放置在二氧化碳培养箱中 37...
细胞复苏后,生长一段时间,95%的细胞贴壁生长,细胞状态良好,说明细胞复苏成功。 瞬转步骤 以Lipofectamine转染试剂为例的操作流程,不同转染试剂参考说明书 将复苏后常规培养的细胞按照1-3×105接种到6孔板中,加入2-4ml的完全培养基,混匀放置在二氧化碳培养箱中37℃过夜 无菌状态下配置如下溶液: a溶液 用100ul的无...
或pORE体上作超表达体行后的瞬化载为载进续时转 。实验 通杆菌化的方式,将上述构建好的粒过农转质转 化到杆菌菌株农GV3101的感受胞中。态细 三、材料的准备 1、烟草植株5-6周幼嫩未开花植株 2、携粒的杆菌(带质农GV3101或An105均可) 3、YEB培养液(一瓶+K+R、一瓶只+R—— ...
操作步骤: 设计合适的 siRNA 序列(对于 siRNA 转染) 选择适当的转染试剂和方法 转染目标细胞并培养一定时间以观察效应 进行基因沉默或目标蛋白的功能研究 需要注意的是,稳转和瞬转并不是互斥的,而是根据实验需求和目的的不同选择不同的转染方式。 有时候可以...
烟草瞬时转化实验步骤烟草叶片瞬时转化实验试验方法一实验材料及药品pcambia1381zluc载体gv3101农杆菌菌株及其感受态mesmgcl2乙酰丁香通56周本氏烟草等二载体构建及农杆菌转化烟草瞬时转化实验选用融合luc信号的pcambia1381zluc载体载体构建过程是将拟南芥及菊花的ft启动子分别采用双切双连的常规载体构建方式将启动子构建到...
通过脂质体介导转染法及电转等基因转染技术,将靶基因导入细胞,一般在转染后 48 小时左右,靶基因即可在细胞内表达。根据不同的实验目的,48 小时后即可进行靶基因表达的检测等实验。 二、材料与仪器 细胞样品、FuGENE 6 或者脂质体等转染试剂 三、步骤 1. 细胞接种:转染实验前一天接种细胞,各种细胞的平板密度依据各...
HEK293细胞瞬时转染操作步骤 1.前期准备 1.1做好STB(随附缓冲液)的配制和预冷。STB是一种用于转染的缓冲液,用于稀释DNA和转染试剂。一般来说,将STB预冷至室温下即可。 1.2对HEK293细胞进行预培养和分装。将HEK293细胞进行培养,保持在良好的生长状态,并按照实验需要将细胞分装到培养皿或板中。 2.转染操作 2.1 ...
在稳定转染分析中,因对转染的细胞进行了选择性扩增,所以克服子瞬转细胞吸收DNA少的缺点。稳定转染分析的另一个特点是对随后的转录分析没有时间限制。因此,稳定转染对所需时间相对较长的研究非常有用。稳定转染分析的缺点是因为要进行药物筛选和细胞扩增,因此操作难度较大,需要的时间较长。
瞬时转染细胞步骤以孔板为例,其余规格的转染见表中板,细胞密度为,适宜,注意,根据转染后细胞检测时间长短决定细胞中板密度,如果转染后需要长时间后检测,则细胞中板密度适当降低,已避免细胞过度生长导致存活降低,第二天,小时后,每个孔转染方式如下
3.转染试剂制备:根据转染试剂说明书的操作步骤,制备转染试剂。 4.转染操作:将转染试剂与外源DNA或RNA混合均匀,在室温孵育15-30分钟,使转染试剂和核酸充分结合。 5.添加转染复合物:将转染复合物滴加至培养皿中,轻轻摇晃培养皿使转染液均匀分布。 6.培养细胞:将培养皿置于恒温培养箱中,根据实验要求进行相应的培养时...