例如这里的Control组Ct值是:13.38、13.60和15.80时,我们选择用几何平均值: 4. 计算ΔΔCt值。用每个样品所得的ΔCt减去第三步的平均ΔCt。 5. 计算 2^-(∆∆Ct)值,即为每个基因的相对表达量 最后在统计分析的时候,直接使用2^-(∆∆Ct)值进行分析可能不会呈现正态分布且偏态严重,这时候可以用log公...
2 - △△ CT 方法可用于定量 PCR 实验来计算基因表达的相对变化: 2 - △△ CT 公式的推导 , 以及实验设计,有效性评估在 Applied Biosystems User Bulletin No.2(P/N4303859) 中有介绍。用 2 - △△ CT 方法分析基因表达数据在文献中也有报道 (5, 6) 。本文介绍了该方法的推导、假设以及应用。另外,本...
用实时 PCR 对基因表达进行相对定量分析需要特殊的公式、假设以及对这些假设的验证。 2 - △△ CT 方法可用于定量 PCR 实验来计算基因表达的相对变化: 2 - △△ CT 公式的推导 , 以及实验设计,有效性评估在 Applied Biosystems User Bulletin No.2(P/N4303859) 中有介绍。用 2 - △△ CT 方法分析基因...
计算出c-myc 和 GAPDH 的平均CT值以及△CT值,通过cDNA 浓度梯度的log值对△CT值作图,如果所得直线斜率绝对值接近于0,说明目标基因和内标基因的扩增效率相同,就可以通过△△CT方法进行相对定量。在图1中,直线斜率是0.047,因而假设成立,△△CT方法可以用来分析数据。如果两个扩增反应效率不同,则需要通过定量标准曲线...
利用实时定量PCR技术通过2-△△CT方法分析相对基因表达差异 KennethJ.LivakandThomasD.Schmittgen DepartmentofPharmaceuticalSciences,CollegeofPharmacy. WashingtonStateUniversity,Washington99164-6534 现在最常用的...
在这个例子中,公式[2]不被公式[3]除,公式[5]变成: <整理得: 任一样品X0,q除以参照品X 0,cb得: 在这里△CT’=C T ,q-C T ,cb。△C T’与前面计算中用的△C T(用目标基因C T值减去参照基因C T值)相互区别。 就象在1.1部分所描述的,如果条件优化较好,效率接近于1,内标相对于参照因子为: 2-...
学海无涯 ;学海无涯 2 - △△ CT 方法的推导 PCR 指数扩增的公式是: ;学 海 无涯 对于使用 Taqman 探针的实时扩增而言, X T 和 R T 的值由一系列因素决定:包括探针所带的荧光报导 基团、探针序列对探针荧光特性的影响、探针的水解效率和纯度以及荧光阈值的设定。因此常数 K 并不一 定等于 1 。 假设...
•2-△△CT方法的推导PCR指数扩增的公式是:学海无涯 Xn是第n个循环后目标分子数。X0是初始目标分子数。Ex是目标分子扩增效率。n是循环数CT代表目标扩增产物达到设定阈值所经历的循环数 因此:XT是目标分子达到设定的阈值时的分子数。CT,X是目标分子扩增达到阈值时的循环数。Kx是一个常数对于内参反应而言,也有...
�6�1 相对定量本身就存在放大的情况,若是再采取2^-△△Ct就只能说看看趋势而已了,所以我在这里给大家推荐ABi官方的一个分析方法,就是log2R,就是log2为底对R求对数。当相对定量分析时,默认扩增效率E趋近或等于100%,这时候R就是2^-△△Ct,当然原本的R的公式我会在后面附上,感兴趣的朋友可以自己去推导...
GAPDH 和β2 -microglobulin 各自的相对量通过2-△CT'公式求得。细胞处理对于GAPDH 的基因表达有明显影响,但对β2 -microglobulin 没有什么影响。因此β2 -microglobulin 很适合做血清刺激定量实验的内标,而GAPDH并不适合。这一例子向大家展示了在只研究一个基因的时候怎么用2-△CT'的方法分析基因相对表达数据。