目前进行病毒定量的方法主要是实时荧光定量PCR方法（Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction , RT-qPCR），通过荧光定量的方法对模版拷贝数进行定量， 每个模板的Ct值与该模板起始拷贝数的对数存在线性关系，利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析，从而反...
qPCR法用于外源病毒污染检测,首先是在病毒数据库中筛选出高频发生且带来一定危害的污染病毒,然后在筛选出的病毒基因组或转录组上设计特异性高的引物与荧光探针,通过后续PCR扩增中的荧光信号值进行实时检测,同时在扩增系统中加入内参和阴阳性质控品对检测试剂、交叉污...
1. 标准曲线 线性化DNA vs 体外转录RNA:线性化DNA:更稳定、易于保存，成本更低。但由于RT-qPCR的第...
1. 来自于真核细胞、原核细胞、病毒的RNA以及体外转录的RNA,均可用于检测。2. 制备的RNA必须不含RT-qPCR抑制剂,例如有机溶剂等。3. 尽量减少RNA样品的冻融次数,同时避免RNA酶污染,以减少RNA降解的风险。(RNA降解会极大地限制了RT-qPCR反应的性能)4. 样本制备过程中,注意避免其他DNA的污染,DNA的干扰也会降低...
1. 基于病毒核酸定量的液滴数字PCR 实时荧光定量PCR方法(Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction , RT-qPCR)是能够定量检测病毒目的基因扩增数量的PCR技术,目前已经发展成为广泛用于多种病毒检测的技术,具有特异性好,灵敏度高的优点。
1.该试剂盒为实时定量qPCR(RT-qPCR)RNA病毒检测试剂盒。 2. 试剂盒由两种组分组成: 组分1. ConviFlex™ RT-Taq Mix的冻干粉包含:MuLV逆转录酶、Taq聚合酶及dNTP。 其中MuLV逆转录酶,来自小鼠白血病病毒(M-MuLV)并经过基因修饰。 这里的Taq聚合酶另兼具热启动功能。
分别使用Yeasen qPCR Mix在Bio-Rad CFX96、ABI Q5及Slan平台上对非洲猪瘟ASFV/ACT双质粒进行扩增,可以看到Yeasen qPCR Mix适配各种机型的仪器,且数据可靠稳定。 1.Bio-Rad CFX96 Real-Time PCR System 2.ABI Q5 Real-Time PCR System 3.Slan Real-Time PCR System ...
qPCR过程中,需先以RNA为模板合成cDNA,故装置中需添加酶逆转录。为确保新冠病毒核酸检测的准确性,在设计PCR引物时必须依据新冠病毒RNA中的特异性核苷酸序列来进行。PCR过程每次循环分为3步,其中温度最低的一步是复性(变性:92℃、复性:50℃、延伸:72℃)。 (2)小问详解: RT-PCR是先将新型冠状病毒的RNA逆转录成...
1.通过多重 qPCR 定量检测贝类中的食源性病毒 采用建立的qPCR建立标准曲线,检测了一年内收集的六种常见的贝类,包括蛤蜊、扇贝、蛤蜊、蚝、蚝和青口的病毒污染水平。其中,青口食源性病毒检出率最高(55.56%,10/18),其次是牡蛎(47.06%,8/17)。其他贝类样本中病毒阳性率为 26.67%—35.29%。在蛤蜊、扇贝、蠔和青口中...