1、什么是VSV 2、VSV的基因组结构 3、VSV假病毒包装原理 4、VSV假病毒应用举例 什么是VSV VSV是Vesicular stomatitis virus的缩写,中文名称为“水疱性口炎病毒”,属于…阅读全文 赞同22 4 条评论 分享收藏 腺相关病毒(AAV)包装相关注意事项 病毒载体包装过程是及其复杂的,在做病毒包装...
四、慢病毒包装的实验步骤（1）构建含有目的基因的慢病毒载体。（2）大量扩增慢病毒载体：根据实验将包装慢病毒过程中需要用到的3个质粒进行高纯度无内毒素抽提。（3）293T细胞内进行慢病毒载体的大量包装：按一定比例将转移质粒、包装质粒和包膜质粒共转染指数生长期的293T细胞。（4）慢病毒的浓缩及纯化：PEG8000浓...
6.病毒浓缩纯化：将收获的含病毒颗粒的培养基，经过 0.22μm 滤膜过滤并收集于无菌超速离心管中，超速离心去上清，重悬沉淀并收集悬浮液，再次过滤除菌，根据每次使用量分装于无菌病毒管中，置于-80℃保存；7.滴度检测：将生长状态良好的 293T 细胞消化计数后稀释至1×105cell/mL，加入96孔板，37℃、5%CO2培养箱...
腺病毒 (Adenovirus) :是一种DNA病毒,具有广泛的细胞和组织感染能力。感染过程剧烈,适于在短时间内进行基因高表达的实验。与其它病毒载体相比,腺病毒最大优势在于插入片段较长,表达活性强;可进行扩增操作。 病毒感染实例如下: 和元生物提供腺相关病毒(AAV)、慢病毒(LV)、腺病毒(ADV)、逆转录病毒(RV)包装服务。这...
慢病毒包装实验 简介 慢病毒(Lentivirus)载体是以 HIV-1 (人类免疫缺陷 1 型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体。慢病毒具有感染谱广泛、可以有效感染分裂期和静止期细胞、长期稳定表达外源基因等优点,因此成为导入外源基因的有力工具。现在慢病毒系统已经被广泛应用到各种细胞系的...
科研达人|病毒感染细胞前准备 (293T 包装病毒) 简介 质粒DNA 和其他包装质粒共转染至细胞(293T 细胞)产生病毒,称为病毒包装。 原理 以慢病毒包装为例,主要包括 3 个质粒:质粒 DNA 可以转录出慢病毒遗传物质(RNA),但不能翻译出慢病毒的外壳及蛋白成分...
一代:①删除剪接供体位点和gag编码区的包装信号;②更换包膜为VSV-G;(增加感染范围及包毒滴度)。 二代 二代:①敲除包装质粒上vpr(引起细胞周期停滞)、vif(抑制细胞生长)、vpu、nef(引起凋亡)基因;②不影响病毒颗粒产生,降低RCL产生风险。 三代/四代
慢病毒包装实验步骤 一、实验材料1. 慢病毒载体慢病毒载体：该病毒包装系统为三质粒系统，组成为pspax2, pMD2G, pLVX-CMV-EGFP-gene或者pLKO-U6-shRNA-EGFP-puro。其中pspax2, pMD2G是辅助质粒，另一个是骨架载体，骨架载体上的EGFP能表达绿色荧光蛋白（GFP），过表达的基因以及敲低序列shRNA均构建在慢病毒...
慢病毒包装流程 1. 重组慢病毒的制备 Day1: 汇合度90%的10cm dishs HEK293T细胞（~ 6×107/dish）按1：1比例传代至15cm dishs，第二天细胞汇合度达到90%-95%（~ 1.5×108/dish），培养基为Gibico高糖DMEM培养基（含10%FBS）。Day2: 转染前2-3个小时更换培养基（含10%FBS)；2)按照以下比例配制...