实验方法 1. 清洗电转杯,将电转杯置于75%酒精中浸泡2小时,然后在紫外灯下照射后即可使用。 2. 电穿孔前一天,以合适密度传代细胞,使细胞在转染前出于对数生长期。对于原代培养细胞,一般培养2-3天后,细胞单层融合度可以达到70-80%,即可开始试验。 3. PBS洗细胞2次,胰酶消化细胞2min,细胞变圆后,用10%血清培养基终止
电转染操作基本步骤 Step 1制备细胞 Step 2施加电脉冲 Step 3使细胞重回生长状态 Step 4检测细胞 让细胞悬浮于电转染缓冲液中,使其做好准备。 电转染的优点和缺点 与其他转染方法相比,电转染具有诸多优势,其中主要优势包括:适用于所有细胞类型的瞬时和稳定转染;在确定最佳电转染条...
1)启动仪器:确认参数设置无误且样品安装妥当后,启动基因导入仪,仪器将按照预设的参数发出电脉冲,使细胞膜暂时形成小孔,从而使目的基因能够进入细胞内部。在操作过程中,要注意观察仪器的运行状态,确保电脉冲的发放正常。 2)监控导入过程:一些先进的基因导入仪可能配备有实时监控功能,可以监测电脉冲的参数...
📋 步骤 准备细胞:首先,需要培养和收集目标细胞。 混合外源性物质:将外源性物质(如质粒DNA)与细胞悬液混合。 电转过程:将混合物置于电转仪中,应用电场。 恢复细胞:将电转后的细胞移至适宜的培养基中,给予时间让细胞膜恢复完整性。🌟 优点 高效:相比化学转染方法,电转染通常具有更高的转染效率。 广泛适用性:...
三、电转染操作步骤 (一)细胞收集 当细胞生长至对数生长期时,用胰蛋白酶或其他合适的消化酶将细胞从培养容器上消化下来。 将消化后的细胞收集到离心管中,以适当的转速(如 1000 - 1500 rpm)离心一定时间(通常为 3 - 5 分钟),弃去上清液。 用适量的无血清培养基或电...
转染 DNA 等生物大分子的基本步骤①转染前1天，接种细胞10个/cm2。②次日换新鲜培养液，37℃培养3~4h后加DNA。③磷酸钙-DNA沉淀的制备，将母液均温育到室温。取所需转化的DNA，加上溶于lmmol/L Tris (pH=8.1)和0.1mmol/L EDTA 中的载体DNA，再加CaCl，使得CaC1终浓度为250mmol/L。轻轻混合后，滴加...
Neon电转染操作步骤 Protocol for Neon transfection system (100 μ l Tips) 电穿孔技术的原理 电穿孔技术是利用 脉冲电场 改变细胞膜的状态和通透性 ,达到将 DNA 导入细胞以及促使细胞发生融合的目的。 该技术目前一方面应用于细菌、真菌、植物、昆虫和哺乳动物细胞的基因转移,另一方面应用于细胞融合 ,制备杂交细胞...
Neon电转染操作步骤Protocol for Neon 电穿孔技术的原理 电穿孔技术是利用脉冲电场改变细胞膜的状态和通透性,达到将DNA导入细胞以及促使细胞发生融合的目的。该技术目前一方面应用于细菌、真菌、植物、昆虫和哺乳动物细胞的基因转移,另一方面应用于细胞融合,制备杂交细胞和动物克隆等 影响电穿孔效率的因素 电场强度:电压太...
悬浮细胞的电融合转染技术 融合悬浮细胞的步骤与电穿孔的很类似,只是在进行高强度的电场脉冲前后,必须用低幅、高频电场使细胞排成一条链。 1 用融合介质(FM)洗悬浮细胞两次,然后悬于FM中。洗涤细胞时,在台式离心机上1000rpm下离心3分钟,得到细胞沉淀,弃去上清液将细胞悬于新鲜FM介质中。
步骤一: 获取目标细胞 步骤二: 混合和结合 转移至Lonza认证的电转杯或电转板条中 步骤三: 选择Nucleofector™程序,放入电转耗材,按下开始按钮 步骤四: 用培养基将电转耗材的细胞转移出来 步骤五: 转移至培养皿中。Nucleofection™电转后3-8小时即可检验 ...