（6）制备感受态细胞冻存样本：再次使用100mL 10%甘油，轻柔并充分重悬感受态细胞沉淀。（7）分装与冻存：将感受态细胞分装至5mL EP管中，每管分装100μL。分装完成后，立即将EP管转移至液氮中。最后，将所有制备好的感受态细胞冻存于-80℃环境中。2 电转感受态细胞制备要点 （1）确保菌种在活化后处于良好生长状...
图1. MegaX DH10B T1R电转感受态细胞与E. cloni® 10G Supreme 电转感受态细胞 (Lucigen) 和 Electro Ten-Blue 电转感受态细胞 (Agilent) 的转化效率比较,使用各生产商推荐的实验方案进行转化。MegaX DH10B T1R的表现优于其他电转感受态细胞。
图1. MegaX DH10B T1R电转感受态细胞与E. cloni® 10G Supreme 电转感受态细胞 (Lucigen) 和 Electro Ten-Blue 电转感受态细胞 (Agilent) 的转化效率比较,使用各生产商推荐的实验方案进行转化。MegaX DH10B T1R的表现优于其他电转感受态细胞。
电转相较于化转尽管能够克服化转的缺点,但也需要控制好一下条件,方能为确保转染成功:1)电压、2)电阻、3)电容、4)缓冲液、5)电击次数、6)细胞(包括感受态细胞)状态、7)细胞(包括感受态细胞)数量。包括但不限于以上条件都会对电转造成影响。 1.4 电转的优缺点 电转优点:操作相对简单、对转化/染难度较大的细...
图1. MegaX DH10B T1R电转感受态细胞与E. cloni® 10G Supreme 电转感受态细胞 (Lucigen) 和 Electro Ten-Blue 电转感受态细胞 (Agilent) 的转化效率比较,使用各生产商推荐的实验方案进行转化。MegaX DH10B T1R的表现优于其他电转感受态细胞。
在制备感受态的过程中，当最后一次吸出sorbital时，应使用毛细管轻柔吸出，以确保剩余的感受态更加纯净。随后，用毛细管取出100ul感受态细胞，加入质粒并充分混匀。注意避免吸取过多，以免影响电转效果。► 电转杯的准备与使用 关于电转杯的处理，首先需进行冲洗和75%乙醇浸泡清洁。在使用前，将其置于超净台上，...
大肠杆菌感受态制备方法(电转化法) 1. 取1mL过夜培养液,接入100ml LB (或SOB)液体培养基中。37°C,220rpm,振摇2-4小时,每半小时测一次OD,当OD值达到0.5~0.7之间时,停止培养。 2. 将菌液在冰上预冷30分钟。同时,开启离心机,预冷至4°C。 3. 随后将菌液...
电转感受态细胞应该在冰上解冻,并通过小心轻弹管子使其悬浮。 将DNA 加入到细胞后,就可以立即开始电转。无需将 DNA 与细胞一同温育。建议 DNA 溶液的最大体积为 2.5 µl。若添加大量 DNA,会降低转化效率。 盐和蛋白质等污染物可降低电转效率。理想情况下,用于转化的 DNA 应进行纯化并重悬于水或 TE 中。
昂羽电转感受态 一、什么是电转感受态 1.一说到“电转感受态”,很多人可能会一头雾水,心想这是什么高深的东西?它并不复杂,简单来说,就是一种让细胞变得特别容易“接纳”外来物质的状态。你可以把它想象成细胞的“敞开胸怀模式”,它会变得特别友好,愿意接收外界的DNA或者其他小分子。其实很多时候,生物学上的一些...
1.从-80℃冰箱中取出感受态细胞，置于冰上解冻；2.取1 μl 纯化后的质粒于一1.5ml的离心管中，将其和0.1CM的电极杯一起置于冰上预冷。3.将40～100ul解冻的感受态细胞转移至此1.5ml 的离心管中，小心混匀，冰上放置10min。4.打开电转仪，调至Manual，调节电压为2.1KV。5.将此混合物转移至已预冷的...