以下是生物素标记抗体的步骤: 1.预处理样本:将样本适当处理(如细胞培养、组织切片等),使其适合于抗体检测。 2.抗原修复:对于一些抗原易于损伤或失活的样本(如石蜡包埋组织),需要进行抗原修复。通常采用高压加热或酶消化等方法。 3.抗体处理:加入适当浓度的生物素标记抗体,将其与目标分子结合。 4.洗涤:用PBS等...
标记前需要应用截留分子量为50kDa 的超滤柱对抗体进行标记前纯化处理(如果不是抗体,一定要按蛋白分子量来确定超滤柱截留分子量),以除去蛋白样品中可能含有的叠氮钠、BSA、甘氨酸、Tris或其他任何有自由氨基的添加物,防止干扰标记反应。 1....
6. 生物素还可能与不同的功能基团,如羰基、氨基、巯基、异咪唑基及苯酚基,也可与糖基共价结合。 7. 交联反应后,应充分透析,否则,残余的生物素会对生物素化抗体与亲和素的结合产生竞争作用。 8. 在细胞的荧光标记实验中,中和亲和素...
微量移液器 步骤: 1. 将待生物素化的蛋白质用0.1 mol/L 碳酸氢钠缓冲液(pH 8.0)或0.5 mol/L 硼酸缓冲液(pH 8.6)稀释到1 mg/ml,一般实验室应用的生物素化体积为1~2.5 ml。 2. 交互用0.1 mol/L 碳酸氢钠缓冲液(pH 8.0)或0.5 mol/L 硼酸缓冲液(pH 8.6),对蛋白质充分透析。 3. 用1 ml DMSO ...
具体计算方式见附录一(标记生物素计算) 2、 超滤后的滤液加入NHS-PEG4-Biotin溶液,室温反应1h。 3、 葡聚糖凝胶分离纯化(去除游离生物素): 四、葡聚糖凝胶分离纯化标记抗体操作步骤: (一)、试剂: 1、纯化柱处理液 :100 mmol/L Na0H; 2、纯化柱平衡液: 50mmol/L Tris-HCl缓冲液(pH7.4),每升含0.5g NaN3...
具体计算方式见附录一(标记生物素计算) 2、 超滤后的滤液加入NHS-PEG4-Biotin溶液,室温反应1h。 3、 葡聚糖凝胶分离纯化(去除游离生物素): 四、葡聚糖凝胶分离纯化标记抗体操作步骤: (一)、试剂: 1、纯化柱处理液 :100 mmol/L Na0H; 2、纯化柱平衡液: 50mmol/L Tris-HCl缓冲液(pH7.4),每升含0.5g NaN3...
具体计算方式见附录一(标记生物素计算) 2、 超滤后的滤液加入NHS-PEG4-Biotin溶液,室温反应1h。 3、 葡聚糖凝胶分离纯化(去除游离生物素): 四、葡聚糖凝胶分离纯化标记抗体操作步骤: (一)、试剂: 1、纯化柱处理液 :100 mmol/L Na0H; 2、纯化柱平衡液: 50mmol/L Tris-HCl缓冲液(pH7.4),每升含0.5g NaN3...
标记步骤: 标记前需要应用截留分子量为50kDa 的超滤柱对抗体进行标记前纯化处理(如果不是抗体,一定要按蛋白分子量来确定超滤柱截留分子量),以除去蛋白样品中可能含有的叠氮钠、BSA、甘氨酸、Tris或其他任何有自由氨基的添加物,防止干扰标记...
标记步骤: 标记前需要应用截留分子量为50kDa 的超滤柱对抗体进行标记前纯化处理(如果不是抗体,一定要按蛋白分子量来确定超滤柱截留分子量),以除去蛋白样品中可能含有的叠氮钠、BSA、甘氨酸、Tris或其他任何有自由氨基的添加物,防止干扰标记...
标记步骤: 标记前需要应用截留分子量为50kDa 的超滤柱对抗体进行标记前纯化处理(如果不是抗体,一定要按蛋白分子量来确定超滤柱截留分子量),以除去蛋白样品中可能含有的叠氮钠、BSA、甘氨酸、Tris或其他任何有自由氨基的添加物,防止干扰标记...