本文报道一种利用温敏型质粒构建基因打靶载体来代替线性DNA打靶片段进行基因敲除的新方法。1 材料与方法1.1 材料 伤寒沙门氏菌(Salmonellatyphi,S.typhi)S.ty2菌株购自军事医学科学院微生物流行病学研究所;大肠杆菌(Escherichiacoli,E.coli)宿主DH5α和Top10菌株由本室保存;温敏质粒pKD46、pCP20及pHY304为本室...
既然是温敏型也就是温度敏感型，肯定是在某个温度界限外传代会逐渐丢失 发自小木虫IOS客户端 ...
基于温敏型质粒而不用线性DNA的方法用于快速敲除沙门氏菌染色体上的目的基因.以伤寒沙门氏茵S.ty2基因组为模板扩增得到的ssaV基因的上下游同源臂,与两端带有FRT位点的卡那霉素抗性基因片段连接到温敏型质粒pHY304,共同构建同源重组载体;然后转化S.ty2,通过筛选得到带有抗性标记的重组菌.通过转入重组酶表达质粒pCP20...
基于温敏型质粒而不用线性DNA的方法用于快速敲除沙门氏菌染色体上的目的基因.以伤寒沙门氏茵S.ty2基因组为模板扩增得到的ssaV基因的上下游同源臂,与两端带有FRT位点的卡那霉素抗性基因片段连接到温敏型质粒pHY304,共同构建同源重组载体;然后转化S.ty2,通过筛选得到带有抗性标记的重组菌.通过转入重组酶表达质粒pCP20...
想问大家有没有做过温敏型质粒的自杀，比如质粒pkc1139;具体是怎么操作自杀的～～～发自小木虫Android...
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