病毒滴度(virus titer)表示单位体积 (通常为mL)液体中具有生物活性的病毒颗粒数,是一个用来综合评估病毒毒性和感染力的指标。空斑实验(Plaque Assay)和TCID50法(50%终点稀释法)是典型的病毒滴度测定方法,通过感染敏感的细胞培养物来测定病毒感染单元或形成病毒斑点数量,从而计算病毒滴度。但存在
II. 加病毒 第二天，准备6个1.5 mL EP管，第一个EP管中加入10 μL病毒原液，然后做3倍梯度稀释，共6个稀释度。III. 追加培养液 第三天，有需要加puromycin筛选的孔，先吸去100 μL含病毒培养基，加入100 μL 含1.5 μg/mL puromycin的10 % FBS完全培养基。IV. 观察结果并计算滴度 第五天，在荧光...
③病毒活性计算公式：对于100 μL样品，滴度T＝101+d（s-0.5） d＝log10稀释度＝1（对于10倍的稀释度而言）s＝阳性比率之和（从第一个10倍稀释度算起）将TCID50/mL转换成PFU/mL： T＝a×10bTCID50/mL＝a×10b-0.7PFU/mL 两次重复实验得到的滴度值应相差≤100.7 以Ad-GFP滴度测定为例： 测定结果...
其中还提到:常见的病毒物理滴度检测方法包括P24 ELISA法(检测载体样本中的p24蛋白)、qPCR法测慢病毒滴度(定量测定上清液中含基因组的慢病毒颗粒)等常用方法,其他新技术检测病毒颗粒数,如病毒计数仪法、纳米颗粒跟踪分析法、场流分离-多角度激光光散射法等,应关注方法对待测病毒类型的...
细胞培养法是一种常用的病毒滴度测定方法。首先，将待测病毒样品与细胞培养基混合，然后在培养皿中接种一定数量的细胞，并将混合液加入培养皿中。接下来，将培养皿放入恒温培养箱中，培养一定时间后观察细胞的感染情况，根据感染细胞的数量可以计算出病毒的滴度。二、血凝法。血凝法是另一种常用的病毒滴度测定方法。
功能滴度（TU/mL）=（阳性细胞百分比×接种细胞数×稀释倍数）÷感染体积（mL）例如，若使用 10⁻³ 稀释度的病毒感染 1×10⁵个细胞（感染体积为 0.1 mL），检测到 20% 的阳性细胞，则功能滴度为：滴度=（0.2 × 1×10⁵×10³）÷0.1 = 2 ×108 TU/mL 三、注意事项 细胞状态把控：细胞...
功能滴度仅统计有感染能力的病毒，结果可靠但耗时长。荧光计数法：用携带荧光报告基因（如GFP）的病毒感染靶细胞（如HEK293T），通过流式细胞术统计阳性细胞比例。例如，某实验室用此法测得滴度为1×10⁸ TU/mL，但需5天培养周期，且荧光表达可能受启动子活性影响。qPCR整合检测：提取感染细胞的DNA，通过qPCR检测...
慢病毒滴度计算需结合病毒样本的稀释过程、核酸提取体积及qPCR 检测的基因组拷贝数，分步骤说明如下：1. 基础公式与核心参数 核心目标：计算每毫升慢病毒原液中的基因组拷贝数（Genome Copies, GC），即物理滴度（反映病毒颗粒总数）。关键参数：2. 分步计算流程 第一步：计算核酸提取液中的总拷贝数 第二步：计算...
杆状病毒滴度检测 为什么需要检测病毒滴度？1.确认病毒滴度，保证包装成功；病毒扩增过程中，高MOI(病毒颗粒数与细胞总数的比值)感染细胞，会产生缺陷病毒。2.确保实验的一致性；3.确认MOI，保证重组蛋白表达效率：重组蛋白生产过程中，MOI通常要求达到1-5左右，以保证细胞能同时感染病毒，保持相似和可重复的生产动力学...
腺相关病毒滴度检测采用实时荧光定量PCR法：滴度单位：vg/mL，指每毫升中含有的病毒基因组拷贝数。"vg"为Vector Genomes的缩写，指病毒基因组的数量。I.检测步骤 ①使用DNase I 及蛋白酶K消化AAV病毒样品。②稀释标准品质粒，设置标准品的拷贝梯度为105 、106 、107 、108 、109 、1010 。③配置QPCR反应体系...