只能检测晚期凋亡DNA发生断裂的细胞,检测凋亡不多。 绿点表示未染色的细胞和红色表示TUNEL染色的细胞。 二、流式细胞术检测细胞因子 Cytometric Bead Array (CBA) :即微量样本多重蛋白定量技术,是一个基于流式细胞检测系统的多重蛋白定量检测方法,能够同时对单个样品中的多个指标进行检测。如细胞培养液中细胞因子含量的...
表一：Annexin V 凋亡实验流式上机对照设置 注意事项 ① 单阳对照组细胞，一定要使用确定有凋亡的细胞，因为调节补偿需要有足够的阳性信号。② 如果细胞带自发荧光，空白对照和单阳对照需要用不带自发荧光的细胞，另外需要再增加一管带荧光但不加任何染料的细胞做单阳对照。细胞带绿色荧光（如：GFP）可以根据流式细...
流式细胞仪检测细胞需要细胞活性好、单个分散,这样才方便实验过程中区分死亡、凋亡和正常细胞。组织在冻存解冻后会有大量细胞死亡、细胞活性下降、粘连破碎等问题,无法再上机检测。流式检测最好是用新鲜的刚取材的样本进行检测,数据准确,操作方便。 2 流式和 Tunel 染...
待测细胞与未标记的重组 Annexin V 预孵育,然后进行实验,是 Annexin V 细胞凋亡检测的质量控制。原理是预先阻断 Annexin V-FITC 的结合位点,这样可以证明 Annexin V-FITC 凋亡分析的特异性。 1. 使用冷的PBS缓冲液洗细胞两次,再用1´Binding Buffer缓冲液制成1´106细胞/ml的悬液。 2. 在5ml的培养管中加...
流式细胞术FACS 检测细胞凋亡(一)。细胞凋亡(apoptosis)是由基因调控的细胞程序性死亡的过程。凋亡细胞形态上表现出细胞核皱缩,细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻线粒体膜电位下降,染色质凝缩和DNA断裂等 实验原理 流式检测细胞凋亡常用FITC-Annexin V/PI检测试剂盒。在细胞凋亡早期PS外翻到细胞膜表面。Annexin-V是一种钙离子依...
通过使用荧光标记的Annexin V(如Annexin V-FITC)与PI的联合染色,可以在流式细胞仪上同时检测PS的外翻和细胞膜的完整性,从而区分活细胞、早期凋亡细胞、中晚期凋亡细胞和坏死细胞。 1.材料 肿瘤细胞系、FALCON 管、EP管、吸头、移液器和400目滤网,胰酶、1XPBS、凋亡试剂盒 ...
流式检测细胞凋亡流式检测细胞凋亡 实验目的 用不同方法处理培养目的细胞,收集细胞,流式检测细胞凋亡 实验材料 1.目的细胞 2.凋亡检测试剂盒 3.流式仪器 实验步骤 1. 细胞培养: 5% CO2,37℃ 二氧化碳培养箱中培养。 2. 细胞铺板 将目的细胞接种在6孔板中,37℃5%CO2培养箱培养24小时 不同的方法处理细胞 3....
流式细胞仪检测细胞凋亡实验步骤是怎么样的呢? 一、实验准备 材料准备 待测细胞样本。 适当的凋亡诱导剂(如果需要诱导细胞凋亡)。 结合缓冲液、Annexin V-FITC/PI 双染试剂盒(或其他凋亡检测试剂)。 流式细胞仪及配套软件。 离心机、移液器等实验器材。 试剂配制 按照试剂盒说明书配制结合缓冲液、染色工作液等...
右下为早期凋亡细胞。 流式细胞仪检测细胞凋亡(中洪实拍,盗者必究) 中洪来加成!有了这些,你的细胞凋亡检测想不成功都难! 1、确保使用正确的缓冲液 Annexin V是钙离子依赖性蛋白,主要结合到磷脂酰丝氨酸。这些磷脂一般都是朝向细胞内的,在早期凋亡时,这些磷脂会反转向外。通过Annexin V和透膜的染料(如7-AAD或...
细胞凋亡的检测方法众多,流式细胞仪检测凋亡,是常用的方法。由于流式细胞仪固有的特点,可以准确的进行凋亡细胞的计数。因此,具有其它方法无可比拟的优越性。 在凋亡诱导剂的作用下,首先是细胞色素C和凋亡肽酶激活因子APAF1形成复合体,线粒体的功能发生衰退;后是casp...