表一:Annexin V 凋亡实验流式上机对照设置 注意事项 ① 单阳对照组细胞,一定要使用确定有凋亡的细胞,因为调节补偿需要有足够的阳性信号。② 如果细胞带自发荧光,空白对照和单阳对照需要用不带自发荧光的细胞,另外需要再增加一管带荧光但不加任何染料的细胞做单阳对照。细胞带绿色荧光(如:GFP)可以根据流式细胞...
流式细胞术(flow cytometry,FCM)是一种能够对单个细胞或生物微颗粒的生物学性质进行定量分析和分选的检测手段,具有快速、高精度、高准确性、多参数和高通量等优点,是目前先进的细胞定量分析技术之一。 本篇内容…
1、检测形态学及细胞膜完整性的Hoechs-PI双染色法 细胞发生凋亡时,其细胞膜的通透性也增加,但其程度介于正常细胞和坏死细胞之间,利用这一特点,被检测细胞悬液用荧光素染色,采用流式细胞仪测量细胞悬液中细胞荧光强度来区分正常细胞、坏死细胞和凋亡细胞。 常用Hoechs-PI染色法,正常细胞对染料有拒染性,荧光着色很浅...
流式检测细胞凋亡常用FITC-Annexin V/PI检测试剂盒。在细胞凋亡早期PS外翻到细胞膜表面。Annexin-V是一种钙离子依赖的磷脂结合蛋白,它对PS具有较高的亲和力。FITC标记的Annexin V可以结合外翻的PS,从而在细胞凋亡早期即可检测到阳性信号。PI或7-AAD是非渗透性核酸染料。死细胞或凋亡晚期细胞细胞膜完整性及通透性散失,...
简而言之,尽管细菌凋亡检测面临着众多技术挑战,科研人员正不断深化对此领域的认识,借助流式细胞术等多种先进检测手段,逐步揭示细菌细胞凋亡背后的精细调控机制及其对宿主系统和生命进化的重要性。然而,当前依然迫切需要更多的实验证据,以准确界定细菌凋亡的边界和特性,同时...
流式细胞仪检测细胞凋亡(中洪实拍,盗者必究) 中洪来加成!有了这些,你的细胞凋亡检测想不成功都难! 1、确保使用正确的缓冲液 Annexin V是钙离子依赖性蛋白,主要结合到磷脂酰丝氨酸。这些磷脂一般都是朝向细胞内的,在早期凋亡时,这些磷脂会反转向外。通过Annexin V和透膜的染料(如7-AAD或PI),可区分早期和晚期...
其中流式细胞术(flow cytometry)是最常用的方法之一,根据不同的细胞特征和所需信息,可以有多种方法用于检测细胞凋亡。下面将介绍三种常用的流式细胞术方法。 1. 荧光标记的Annexin V/PI双染法: Annexin V是一种细胞外结合蛋白,具有高度特异性结合细胞凋亡的特点。当细胞凋亡发生时,磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞内翻转...
1. 诱导培养检测凋亡细胞的时间要准确。 2. 旋帽离心管装的试剂在开盖前需要短暂离心,将盖内壁上的液体用至离心管底,尽量避免开盖时液体洒落出来。 3. Annexin V-FITC和Propidium iodide是光敏物质,流式检测保存与操作时请注意避光。 4. Propidium iodide (PI) ...
总结流式细胞仪检测凋亡细胞的方法具有快速、灵敏、准确的特点,广泛的特异性标记抗 体、核酸染料可以帮助分离出不同凋亡阶段的细胞群。单一标记的流式细胞检测方法无法很 好分离出不同凋亡阶段的凋亡细胞,利用 Annexin V/PI 双染法可以很好地区分凋亡早期和 凋亡中晚期的细胞,但同时,流式细胞术检测凋亡细胞时还应当...
细胞凋亡线粒体膜电位检测PI单染法DNA含量检测目的:比较流式细胞仪检测细胞凋亡4 种方法的优缺点.方法:对收集到的细胞分别使用DNA 含量检测,AnnexinV-FITC/PI 法,线粒体膜电位检测,钙离子浓度检测测定凋亡细胞凋亡率并进行分析比较. 结果:双染法检测细胞凋亡效果好,分组明 显,早期凋亡细胞约为72.8%,晚期凋亡细胞...