一、FITC染料 FITC(荧光同工素)染料是最常用的流式常用染料之一,其激发波长为488nm,发射波长为530nm。它的优点是发射强度高,易于检测,而且还可以与其他染料进行共染色。FITC染料常用于细胞表面分子的标记,如CD4、CD8等。 二、PE染料 PE(腺苷酸酰化酶)染料是另一种常用的流式常用染料,其激发波长为488nm,发射...
其中活细胞的细胞膜完整,仅细胞表面蛋白胺基结合了染料,呈现较弱的荧光信号;而死细胞的细胞膜通透性改变,染料能够进入死细胞,与细胞内和细胞表面蛋白上的胺基结合,因此死细胞呈现更强的荧光信号。 Fixable Viability Dye流式染色结果解读。将未染色细胞和Fixable Viability Dye染色细胞流式分析结果合并分析。相对于未染色...
死活染料选择直接影响细胞分群质量。PI和7-AAD适合末端固定实验,而FixableViabilityDye系列能与固定破膜步骤兼容。Hoechst33342用于细胞周期检测时注意染色浓度,过高会导致细胞毒性。DNA染料DAPI必须用紫外激光激发,常规流式细胞仪可能无法检测。 多色搭配讲究策略。先确定仪器配置,三激光(488nm、640nm、405nm)设备可同时检...
表达相互排斥的抗原指的是两种抗原不会同时表达在一种细胞上，这两种抗原表达在两种细胞上（例如CD4和CD8），因此流式图上分群很明显，即使荧光染料之间干扰很大，也很容易通过补偿的调节避免干扰；而共表达的抗原指的是这两种抗原表达在同一种细胞上（例如CD4和CD25），在流式图上我们是要分析双阳性的细胞比例，因...
在设计流式配色方案时，我们必须选择那些流式细胞仪能够检测的荧光染料。这需要我们深入理解几个关键因素：首先，要了解仪器配备的激光器数量及其波长；其次，需要明确每个激光器对应的检测通道；最后，也不能忽视对荧光素基本知识的掌握。接下来，我们将深入探讨流式细胞仪的光学系统。激光光源是其中的核心组件，其光束...
有现货(需要3-4周的订货时间),可能你的实验同时需要检测其他一种或多种蛋白,则需要订购其他不同荧光染料的流式抗体确保没有重复的染料选择,这时候就需要你具备一定流式染料选择的能力,可以在现有条件下依旧能推动实验的进行,不受等待试剂到货的折磨(p.s相信很多同学都有类似的体验),本期主要举例来图解流式染料...
固定和通透步骤可能会降低串联染料的亮度 在进行多色流式细胞术时,使用适当的对照,如用于背景的同型对照、未染色的细胞和用于补偿的单色对照 在分析数据之前确定是否需要补偿,这是由于两个或多个串联体的发射光谱重叠。 AAT提供多种PE和PE串联染料: ✦ ...
按照之前的图解,这两个流式抗体应该是用不同的滤光片去接收(如下图所示),应该是没有较多的串色,也就是上一期推送讲到的荧光溢漏(图解流式 | 第13期. 流式荧光染料选择全攻略(二)),但实际上,是需要调节补偿的,在上机调补偿过程中,能看到明显的荧光溢漏现象(在BV421与BV650组成的象限中有明显的靠近对角线...
3. 藻红蛋白（phycoerythrin，PE）：PE是从红藻中分离纯化获得的一种常见染料，经激光激发后发出橙黄色荧光，最大发射波长为575 nm。PE具有吸光性能好和光量子产率高的特点，可用于标记表达水平较低的蛋白。在流式细胞术检测中，PE标记的抗体适用于所有配备488 nm氩离子激光器的流式细胞仪。4. PE-Cy5：PE-Cy5...