泛素化WB即通过蛋白质免疫印迹法(Western Blot,WB )来检测蛋白质的泛素化水平,其原理是基于抗原与抗体特异性结合的特性,具体如下: 1. 样品制备:首先需要从细胞或组织中提取总蛋白。在提取过程中,要使用特殊的裂解缓冲液以保证泛素化修饰的蛋白质不被降解。 2. SDS-PAGE电泳:将提取的蛋白质样品与上样缓冲液混合...
✅Co-ip定性实验:只看A和B有无结合 ✅Co-ip定性➕定量实验:不同处理条件下看A和B结合的强弱 ✅ip实验:这里指代泛素化 做WB每个步骤都要注意的点有很多,之前我也分享过很多关于WB的tips,在相关合集里,大家可以自行翻看。 另外,对于WB实验技术的学习,我会陆续分享更多的figure解读,想学习的宝子可以蹲一...
泛素化WB条带通常呈现为一大长条,这是因为检测的是所有发生泛素化的蛋白条带。如果您想检测特定蛋白的泛素化,比如p53,可以通过免疫共沉淀(IP)将泛素化的p53捕获下来,再通过WB检测泛素化的产物。这样可以帮助您更准确地分析特定蛋白的泛素化情况。
因为蛋白存在不同亚型,它们在分子量上有所差异,因此在WB中会显示出多个条带 二、WB-泛素化 1.图片解读 (1)MG132:一种蛋白酶抑制剂,能够抑制26S蛋白酶体(泛素-蛋白酶体系统,UPS)的活性。UPS负责降解泛素标记的蛋白质,维持蛋白质质量并调节蛋白水平。MG132阻断这一过程,使得泛素标记的蛋白质在细胞内积累 (2)...
泛素化经常wb显不出来的原因如下：1、抗体问题：使用的抗体不够特异或者不适合于Westernblot分析。确保使用的抗体是经过验证并且具有较高的特异性。2、样品制备问题：样品制备过程中存在错误，如蛋白质提取不完全或者失去了泛素化结构。确保充分提取样品，并避免热处理等会导致泛素化结构丢失的步骤。3、泛素...
还可以突变Ub为Ub-K63R，Ub-K48R等，看你的A蛋白更喜欢结合哪个，从而推测A蛋白是否是通过泛素化...
一种蛋白酶抑制剂只能抑制一部分泛素化，不能完全抑制。所以你的结果还是有泛素化后降解的条带弥散现象 蛋白
泛素基因UBB含有3个泛素的重复序列,而且这三个重复序列间没有间隔序列。其蛋白作为一个多聚泛素前体形式表达,而后会形成单体及其他形式多聚体。而泛素单体大小刚好为8kDa。许多需要降解的蛋白需要通过泛素标记,因此泛素化蛋白大小变化通常是8kDa的倍数。 ...
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WB磷酸化/泛素化/乙酰化/乳酸化实例图到底怎么看! #科研 #WB #实验室日常 #磷酸化 #泛素化 - 单细胞于20250105发布在抖音,已经收获了1643个喜欢,来抖音,记录美好生活!