研究表明蛋白质泛素化参与PTI和ETI过程中的信号转导。在本研究中，为了获得蛋白质泛素化在免疫识别过程中的作用，作者利用高通量质谱分析，鉴定了植物发生免疫反应的成分和途径。二、实验方法 flg22处理两周大的拟南芥幼苗为实验组、未经处理的幼苗为对照组，每组三个重复。将实验组和对照组的分别提取物置于含有TritonX-
探究USP22降解NLRP3蛋白的方式;通过构建EBSS或雷帕霉素诱导的USP22敲除的细胞自噬模型,采用WB、免疫荧光法探究USP22对自噬的影响;通过CO-IP、WB、免疫荧光、ELISA探究USP22影响自噬作用的分子机制;最后通过点突变+CO-IP+泛素化实验对蛋白-蛋白的结合位点进行解析。
4.泛素化实验的常用技术 1. 质谱分析: 可以用于鉴定泛素化位点，以及与之相关的泛素链类型（例如K48 vs. K63链）。2. 免疫印迹（Western Blot）: 使用抗泛素抗体可以检测特定蛋白质的泛素化水平。3. 免疫共沉淀（Co-immunoprecipitation）: 使用特异性抗体捕获目标蛋白，然后进行Western blot分析来检测其泛素化状态...
泛素化是一种重要的蛋白质翻译后修饰过程,通过共价连接泛素分子到目标蛋白上,参与调控多种细胞功能,如蛋白质降解、DNA修复和信号传导等。免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)技术是研究泛素化的重要手段之一,能够特异性地富集并纯化与特定抗体结合的泛素化蛋白复合物。本文旨在提供一份详细的泛素化IP实验结果分析指南,帮助...
泛素化实验旨在探究蛋白质与泛素间的修饰关系 。原理基于泛素分子能共价结合到靶蛋白特定赖氨酸残基 。该过程需泛素激活酶、结合酶和连接酶协同作用 。实验前要准备合适的细胞系或组织样本 。细胞培养时需维持适宜的温度、湿度与气体环境 。收集样本时要注意避免蛋白降解等问题 。提取总蛋白是后续实验的重要起始步骤 。
检测体内泛素化蛋白最直接的方法是进行免疫沉淀实验，通过体内泛素化实验联合免疫共沉淀的检测方法，可识别特定赖氨酸残基的泛素化或确认特异的泛素结合酶/泛素连接酶是否在靶蛋白的修饰上发挥了作用。然后用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰氨凝胶电泳（SDS-PAGE）/免疫印迹进行表征并观察泛素化蛋白的特征，从而对蛋白质体内泛素化...
检测体内泛素化蛋白最直接的方法是进行免疫沉淀实验,通过体内泛素化实验联合免疫共沉淀的检测方法,可识别特定赖氨酸残基的泛素化或确认特异的泛素结合酶/泛素连接酶是否在靶蛋白的修饰上发挥了作用。然后用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)/免疫印迹进行表征并观察泛素化蛋白的特征,从而对蛋白质体内泛素化进行...
🔬 蛋白泛素化实验是研究蛋白质修饰的重要手段,通过这一过程,我们可以深入了解蛋白质的功能和调控机制。实验主要分为以下三步:1️⃣ 发现潜在的E3连接酶:通过酵母双杂交筛选或pull down-LC-MS技术,我们可以找到与特定底物蛋白相互作用的E3连接酶。此外,UbiBrowser也是一个有用的工具,可以帮助我们预测底物蛋白最可...
泛素蛋白是一种普遍存在于真核细胞中的小分子蛋白质，而泛素化实验是研究泛素蛋白与目标蛋白共价键连接过程的重要实验。关于泛素蛋白： 组成：由76个氨基酸组成，分子量约为8.5 kDa。 功能：在细胞内扮演重要角色，涉及蛋白质的降解和信号转导等众多细胞过程。关于泛素化： 定义：即泛素蛋白与目标蛋白的...
泛素化实验是一种生物学实验技术，主要是为了研究蛋白质被泛素修饰的生物学机制。泛素蛋白是一种具有多种生物学作用的肽链，它能够将蛋白质标记为待降解的废弃物，使被标记的蛋白被细胞识别并分解。泛素化实验通过加入泛素蛋白来研究这些修饰事件的规律、机理和生理意义。泛素化实验的主要方法是构建泛素表达...