①核酸类死活染料: a.按常规流式染色流程,完成表面染色后; b.在1×10^6细胞 的100 µl细胞悬液中,加入适量核酸类死活染料,轻摇混匀; (7-AAD(Cat. 556463): 5 µl, 50 µg/ml;PI(Cat. 556463): 10 µl, 50 µg /ml;DAPI(Cat. 564907): 0.5~2 µl, 1 mg/m
传统的流式细胞死活染料为细胞膜非通透性的核酸染料,例如PI、7-AAD、DAPI。这类核酸染料能穿过死细胞的细胞膜,结合核酸后发出荧光,而无法穿过活细胞的细胞膜。最后染,快速上机。 但是,如果实验涉及到胞内染色,细胞需要固定破膜,核酸染料会将所有的细胞都染上颜色,难以分辨死活信号。此时您应该选择可以固定的细胞死活...
一、流式为什么要染死活染料? 样品中死细胞的存在会极大地影响流式检测效果,从而最终影响数据质量及真实性。 这主要是因为: ①死细胞具有更大的自发荧光,且这种自发荧光信号几乎在所有荧光通道均可检出; ②会增加非特异性的抗体结合,导致假阳性并增加背景信号从而降低阳性信号的动态范围,这可能会使弱阳性样本和稀有...
在活细胞中,Zombie染料只能和细胞表面的膜蛋白结合,表现为弱阳性。而在死细胞中,由于完整性被破坏,Zombie染料不仅可以和膜表面蛋白上的伯胺结合,还可以和胞浆内蛋白的伯胺基团结合,呈现出强阳性,所以可以通过信号的强弱来区分细胞的死活。 有机溶剂,比如实验...
在流式细胞技术中，细胞功能是指细胞执行其特定任务的能力。通过流式死活染料的选择，我们可以评估细胞功能的完整性。不同的染料会对细胞的生理状态产生不同的影响，因此选择适当的染料对于准确评估细胞功能至关重要。综上所述，流式死活染料的选择要点包括考虑细胞膜完整性和细胞功能。通过了解这些要点，我们可以更好地...
鉴定细胞死活的染料有很多种,具体可以根据实验需求选择合适的染料。常用的染料包括台盼蓝、碘化丙锭、美蓝染料等。台盼蓝只能对死细胞着色,活细胞不会被染色,适合用于测定活细胞数和存活率。碘化丙锭可以区分坏死细胞和活细胞,坏死细胞会着色,而活细胞不着色。美蓝染料则通过活细胞的还原能力,使染料从蓝色变为无色,死...
死活染料为何成为科研必备? 在生物学研究中,死活染料的使用至关重要,因为它能有效排除死细胞带来的非特异染色背景,从而提高实验结果的准确性。🔍 🌈 首先,死细胞常常与我们的抗体结合,产生非特异染色,这对实验结果造成干扰。因此,使用死活染料来识别和排除死细胞是必要的。 🌈 然而,需要注意的是,DNA结合类死活...
图1: LIVE/DEAD 可固定死活细胞染色原理。 非细胞通透的胺反应染料仅能结合到活细胞的表面,产生非常微弱的荧光。但这些染料可穿透死细胞的细胞膜并与内部的蛋白发生结合,从而产生极强的荧光。 活细胞和死细胞群之间的荧光强度差异通常在50倍以上,因此两者之间可实现完全区分(图 2A)。 此外,染料与蛋白(胺)之间的共...
死细胞的鉴别一般通过DNA结合染料排除,利用死细胞膜通透性增大、不破膜的情况下DNA染料即可进入的特点区分出死细胞,但所用染料浓度、时间远远低于细胞周期所用的浓度,并且不需要固定。 常用的核酸结合死活鉴别染料包括: 碘化丙啶(propidium iodide,PI)...
流式检测中使用死活染料的全攻略如下：一、重要性 减少死细胞干扰：死细胞具有更高的自发荧光，可能导致假阳性或假阴性结果，使用死活染料能有效区分活细胞和死细胞，减少死细胞对检测结果的影响。 提高数据质量：通过排除死细胞的干扰，流式检测的数据更加真实可靠。二、染料类型与选择 类型：死活染料主要...