1️⃣ LC3双荧光标记法:利用同时带有RFP和GFP的病毒感染细胞,通过观察荧光变化来判断自噬进程。GFP在酸性环境下会淬灭,而mRFP则稳定表达。自噬发生时,可见明亮黄光点,表示自噬体被红、绿光同时标记;当自噬体与溶酶体融合,GFP荧光淬灭,只测到红光,表示自噬溶酶体形成。2️⃣ GFP-LC3单荧光自噬指示体系:利用LC...
检测线粒体自噬的方法有很多,比如免疫印迹、免疫荧光、电子显微镜等。你可以通过检测某些关键蛋白的表达水平,或者观察线粒体的形态变化来间接推断线粒体自噬的发生。当然,最直接的方法还是电子显微镜,直接观察线粒体的变化。 总结线粒体自噬是细胞为了维持自身稳态而采取的一种策略。通过选择性地包裹和降解受损或功能障...
以去除未结合的二抗。检测：根据二抗的标记类型，选择合适的检测方法。如使用荧光二抗，可通过荧光成像仪进行检测；若使用酶标二抗，则加入相应的底物进行显色反应，然后通过化学发光成像仪或凝胶成像系统进行检测和分析。通过比较不同处理组或不同时间点细胞中自噬相关蛋白的表达水平，来评估线粒体自噬的活性变化。
线粒体自噬的检测方法 线粒体自噬的检测方法主要有以下几种: 1.透射电镜技术(TEM):这是研究自噬发生的最直接、最可靠的手段。透射电镜可以观察到线粒体自噬体和线粒体自噬溶酶体的形成和结构特征,从而判断自噬是否发生。 2.荧光显微镜技术:通过荧光标记的方法,可以观察线粒体自噬的动态过程,例如使用荧光探针标记...
1️⃣ 直接观察法:通过电子显微镜或荧光显微镜,可以直观地看到线粒体自噬体的结构和动态过程。这种方法能够直接观察到线粒体自噬的发生,但操作复杂,对设备要求较高。2️⃣ 间接反映法:流式细胞术可以检测线粒体膜电位、线粒体总量,而免疫印迹技术则可以检测线粒体自噬相关蛋白的表达量。这些方法间接反映了线...
🔍 研究方法: 金指标检测:通过western检测LC3-II,LC3-GFP测细胞自噬体,Mito-RFP定位线粒体,电镜观测线粒体自噬。 激活剂与抑制剂:CCCP/FCCP超强线粒体去极化作用,Antimycin A和Valinomycin较温和的诱导药物。线粒体自噬抑制剂如CsA。 荧光染料:观测线粒体膜蛋白Tom20、自噬体蛋白LC3B和溶酶体蛋白LAMP2。RFP-...
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1) 通过电子显微镜或荧光显微镜直接观察线粒体自噬体的结构或线粒体自噬的动态过程; 2) 通过流式细胞术检测线粒体膜电位、线粒体总量及免疫印迹技术检测线粒体自噬相关蛋白表达量的变化等方法间接反映线粒体自噬活性; 3) 通过人为对线粒体自噬通路进行实验性调节来全面评...
自噬的检测方法 透射电镜法 自噬体属于亚细胞结构,普通光镜下看不到,直接在透射电镜下观察自噬不同阶段的形态变化。 隔离膜的产生发生在自噬初期,自噬小体的产生发生在自噬中期,自噬溶酶体发生在自噬后期。 荧光法 自噬发生时,细胞内产生大量的自噬体,内源性LC3...
🔍 研究线粒体自噬及其活性,科学家们采用了多种方法。以下是三种主要方法:1️⃣ 直接观察法:利用电子显微镜或荧光显微镜,直观地观察线粒体自噬体的结构和动态过程。2️⃣ 间接反映法:通过流式细胞术检测线粒体膜电位、线粒体总量,以及免疫印迹技术检测线粒体自噬相关蛋白的表达量变化,从而间接反映线粒体自...