1. 4oC,最高速 (14000-16000 rpm) 离心 5 分钟 2. 将上清液(上清为胞浆组份)转移到一个新的预冷的 1.5 ml 离心管中。将沉淀(可选优化:用 0.5 ml 预冷 PBS 重悬,10000 rpm,离心 3-5 分钟清洗沉淀可以减少胞浆蛋白污染)中加入适量的胞核提取缓冲液,涡旋大力震荡 15 秒,冰上孵育 1 分钟。 然后重复...
核蛋白提取方法 BestBio贝博 蛋白提取 细胞检测1 人赞同了该文章 实验样本为动物的细胞或者组织,提取核蛋白,下游做WB IP 酶活检测等 可以参考下贝博 BB-3102 细胞蛋白提取 1. 提取液制备: 每300ul冷的蛋白提取液A加入1ul蛋白酶抑制剂混合物和1ul磷酸酶抑制剂。 每200ul冷的蛋白提取液B中加入1ul蛋白酶抑制...
9. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到核蛋白。 组织蛋白提取: 1. 取适量组织样本剪碎,加冷PBS,用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体(或用液氮研磨),冰上静置5分钟,小心将上清吸入另一预冷的干净离心管。 2. 在4℃,500×g条件下离心2-3分钟,弃上清。 3. 每20ul细胞压积中加入200μl冷的Bu...
进一步,步骤B中,将步骤A所得核蛋白粗提液冰浴超声,40瓦功率条件下每10毫升体 积的核蛋白粗提液超声5分钟,IOOOOOXg离心1小时,取上清液,核蛋白存在于所述上清液 中; 进一步,所述核蛋白为非变性核蛋白。本发明的有益效果在于在细胞裂解液处理的基础上,联合使用超声裂解的方法, 避免大量的核蛋白随DNA —起沉淀...
1、提取细胞核蛋白的步骤:1.向培养细胞的平皿中加入少量(保证在TUBE内能放下)冷 PBS(或1*D-Hanks)1 .,用细胞刮刀尽可能多的刮下细胞,收集到的离心管中。在预冷的离心机中,4度, 1000rcf , 1 3分钟,沉降细胞。 为尽可能多的获得细胞,可将一次离心后的上清再重复刮细胞一次;2 .将细胞重悬于 cell lysis...
提取细胞质和细胞核蛋白方法 操作步骤: 1.决定细胞生长状态,细胞生长状态应该是80%或者更好: 2.用离心机以1500r/min离心5min 3.弃上清液,用等体积的冷PBS洗细胞,像步骤2那样,反复3次 4.根据估计的沉淀量加入5倍体积的isotonic lysis buffer到细胞颗粒中,使细胞温和悬浮,尽量避免泡沫...
使用方法: 1. 提取液制备:每500ul预冷的.核蛋白提取液A和200ul提取液B中分别加入2ul 蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。 2. 取洗净擦干后并去除叶梗和粗脉的200mg植物组织样本剪碎,采用以下一种方 法处理: i. 加入500ul提取液A后用匀浆机/匀浆器匀浆。 ii. 置于研钵中用液氮研磨,研磨后加入500μ...
方法: 1、分别应用Dounce匀浆器研磨法、试剂盒提取法和涡旋破膜法提取HeLa细胞核蛋白; 2、Bradford法测定蛋白浓度; 3、Western blot检测标志性胞浆蛋白和核蛋白; 4、双向电泳后银染扫描图像,PDQuest8.0分析图像。 结果:涡旋法获得核蛋白的过程所需时间最短;核蛋白提取试剂盒和涡旋法能够较快速的获得相对较纯的核蛋...
核蛋白蛋白细胞系提取涡旋细胞核 肝组织细胞核蛋白和胞浆蛋白提取试剂:凯基核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒、PBS。仪器:高速冷冻离心机、微量移液枪。耗材:EP管(2ml的EP管离心后震荡相对均匀些)、枪头。操作步骤:1、以35mm培养皿细胞为例,每板加入200μL胰酶消化液,将细胞消化下来,待细胞呈单个细胞时,加入1mL培养液...
核蛋白蛋白细胞系提取涡旋细胞核 肝组织细胞核蛋白和胞浆蛋白提取试剂:凯基核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒、PBS。仪器:高速冷冻离心机、微量移液枪。耗材:EP管(2ml的EP管离心后震荡相对均匀些)、枪头。操作步骤:1、以35mm培养皿细胞为例,每板加入200μL胰酶消化液,将细胞消化下来,待细胞呈单个细胞时,加入1mL培养液...