摘要:哺乳动物细胞核移植 ( 克隆 ) 的基本技术程序 (三 ) 注核 去核卵母细胞经恢复就可作为核移植的受体接受核供体移入。按核供体移入部位的不同分两类,即带下移植(注射)和细胞质内注射。若采用带下注射,可采用斜口玻璃针(大小时核细胞大小而定)吸取已分离好的单个供体细胞,并沿去核时留在透明带上的切...
摘要:哺乳动物细胞核移植 ( 克隆 ) 的基本技术程序 4. 微分干涉和极性显微镜去核法 对于一些脂肪颗粒含量较少的卵母细胞(如兔和小鼠等),在微分干涉相差显微镜下观察到染色体,因此对于这类卵母细胞可直接在微分干涉相差显微镜下去核(kono et al,1991)。然而,对于脂肪颗粒含量较多的卵母细胞(如猪),在微分干涉相差...
一二二、DNA重组技术的基本工具 1.限制性核酸内切酶——“分子手术刀” (1)主要来源:原核生物。 (2)作用:能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列,并且能使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 (3)结果:形成DNA片段末端。限制酶切割DNA分子产生的DNA片段末端有两种形式,即黏性末端和平末端。
1. 胚胎细胞作为核供体 哺乳动物胚胎细胞核移植实验证实,从 2 细胞期到内细胞团的胚胎细胞团细胞都具有发育的全能性,都可以作为供体细胞。然而供体细胞的胚胎的胚龄和类型对核移植结果有时产生一定的影响。哺乳动物的胚胎细胞核移植时一般选择 16～32 细胞期的胚胎细胞作为例较为合适。Zakharchenko(1996)等的研究则...
摘要:哺乳动物细胞核移植 ( 克隆 ) 的基本技术程序 (二 ) 受体卵母细胞的准备 在哺乳动物的核移植研究中,用作核受体的主要有去核受精卵(原核胚 ) 及去核MⅡ成熟母细胞两种。虽然采用去核受精卵的细胞质作为核受体己得到了克隆动物,但供体胚胎不能超过2细胞阶段,否则其重构胚无法正常发育。成熟的卵母细胞被广...
摘要:哺乳动物细胞核移植 ( 克隆 ) 的基本技术程序 3. 胚胎干细胞作为核供体 ES 细胞是早期胚胎细胞或囊胚内细胞团细胞经抑制分化后培养而筛选出来的一类全能细胞,这种细胞具有正常的二倍体核型,它既可以在特定条件下进行无限增殖而不发生分,又可以在特定条件下分化为包括生殖系在内的各种细胞和组织(Evans and kau...