qPCR染料法的原理 qPCR染料法在体系中额外加入了非特异性双链DNA荧光染料(通常为SYBR Green I),游离的荧光染料本身不发光或只发出极弱的荧光信号,但染料可以非特异地结合在双链DNA小沟上,并发出较强的荧光信号。随着PCR循环数的增加,越来越多的染料与双链DNA结合,产生的荧光量与双链DNA含量成正比。因此可以通过检...
【SYBR Green I法引物设计要点】在运用SYBR Green I染料法进行qPCR实验时，引物设计相较于普通PCR扩增引物，需要额外注意以下几个关键原则：1、在运用SYBR Green I染料法进行qPCR实验时，首要原则是选择具有高度特异性的引物对，以确保扩增产物不会形成二级结构。2、扩增的熔解温度（Tm）应控制在约60℃，因为这是SYB...
在qPCR实验中，染料法是一种常用的检测技术。其中，SYBR Green染料法备受推崇。它通过SYBR Green染料与PCR过程中生成的双链DNA相结合，实现对PCR产物的有效检测。其具体实验流程如图1所示：在PCR反应中，DNA聚合酶会作用于特定序列，从而生成PCR产物，即所谓的“扩增子”。紧接着，SYBR Green染料会与每一个新形成的...
qPCR染料法的原理 qPCR染料法在体系中额外加入了非特异性双链DNA荧光染料(通常为SYBR Green I),游离的荧光染料本身不发光或只发出极弱的荧光信号,但染料可以非特异地结合在双链DNA小沟上,并发出较强的荧光信号。随着PCR循环数的增加,越来越多的染料与双链DNA结合,产生的荧光量与双链DNA含量成正比。因此可以通过检...
qPCR染料法在体系中额外加入了非特异性双链DNA荧光染料(通常为SYBR Green I),游离的荧光染料本身不发光或只发出极弱的荧光信号,但染料可以非特异地结合在双链DNA小沟上,并发出较强的荧光信号。随着PCR循环数的增加,越来越多的染料与双链DNA结合,产生的荧光量与双链DNA含量成正比。因此可以通过检测qPCR体系中的荧光...
qPCR小课堂之SY..qPCR染料法的原理qPCR染料法在体系中额外加入了非特异性双链DNA荧光染料(通常为SYBR Green I),游离的荧光染料本身不发光或只发出极弱的荧光信号,但染料可以非特异地结合在双链DNA小沟
qPCR染料法在体系中额外加入了非特异性双链DNA荧光染料(通常为SYBR Green I),游离的荧光染料本身不发光或只发出极弱的荧光信号,但染料可以非特异地结合在双链DNA小沟上,并发出较强的荧光信号。随着PCR循环数的增加,越来越多的染料与双链DNA结合,产生的荧光量与双链DNA含量成正比。因此可以通过检测qPCR体系中的荧光...
💡 SYBR Green法: SYBR Green是一种荧光染料,它能够与双链DNA结合并发出荧光。在qPCR反应中,SYBR Green的荧光信号随着PCR循环的进行而逐渐增强。通过监测荧光信号的变化,可以实时监控PCR反应的进程,从而实现对DNA模板的定量分析。 🔍 Taqman探针法: Taqman探针法利用了特定的寡核苷酸探针,这些探针能够与目标DNA序列...
我们通常使用染料法实现qPCR的实时监控,那么染料法如何实现qPCR的实时监控呢?染料法就是在PCR反应体系中加入荧光基团,我们常用的染料就是SYBR Green Ⅰ这种染料。这种染料有以下特性:该染料可以非特异地结合在双链DNA小沟上,而不与单链结合。这里的非特异性是指,只要是双链DNA,它都能结合上去,不管该双链DNA是否是...
实时荧光定量PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。 实验材料:动物组织或血液 试剂/试剂盒:RNA提取试剂盒、Quantscript RT Kit试剂盒、荧光定量PCR Mix (SYBRGreenRealtimePCRMasterMix)、TRIZON试剂、琼脂糖、MOPS、DEPC等。