易错PCR诱变出现的最多变异类型是点突变,删除引起的移框突变也偶有出现。即在易错PCR诱变体系中,Mg2+浓度提高4.7倍,Taq DNA聚合酶提高2倍,添加Mn2+,提高5倍的一种或两种dNTP浓度。按以上标准易错 PCR体系进行诱变,可构建无序列倾向性的基因随机点突变库,每个核苷酸的突变率约为6.6 ×10-3。 提高诱变率的其他方...
TaqDNA聚合酶与一般DNA聚合酶相比最大的特点是高温下保持酶的活性或耐高温或热稳定,其某一区域负责将碱基与模板链正确地互补配对,Mn2+可以降低这一功能,提高碱基的错配,而Mg2+可以提高稳定性,故易错PCR时应适当提高Mn2+和Mg2+浓度。(4)通过易错PCR技术改造天然酶属于基因工程,与通过蛋白质工程改造天然酶原理的...
进行易错PCR时,加入Mn2+可()A.增加聚合酶对模板的特异性B.降低聚合酶对模板的特异性C.增加非互补碱基对的稳定性D.以上说法均不对点击查看答案&解析 手机看题 你可能感兴趣的试题 单项选择题 被誉为“分子手术刀”的是() A.限制性内切酶B.DNA连接酶C.DNA聚合酶D.RNA聚合酶 点击查看答案&解析 手机看题 ...
解析 策略:易错PCR,DNA改组,外显子改组,杂合酶,PCR体外随机引发重组,交错延伸,随机定向突变。易错PCR是在采用Taq酶进行PCR扩增目的基因时,通过调整反应条件,如提高Mg2+浓度,加入Mn2+,改变体系中四种dNTP的浓度等,然后选择或筛选需要的突变体。反馈 收藏
Mn2+ 代替Mg2+，降低PCR的保真性 dCTP,dTTP,改变四种dNTPs的平衡，降低扩增保真性。MnC
另外,应用易错 PCR 时一般都要针对具体基因进行诱变条件的优化,需要优化的条件有多个,包括 Mn2 +浓度、Mg2 +浓度、4 种 dNTP 浓度、TaqDNA 聚合酶浓度、模板浓度、延伸时间、循环次数等,这些条件综合起来优化还比较费力。 针对以上问题,可能的解决途径有以下几个: 一是从 Taq DNA 聚合酶的基本特性入手,寻找新的...
研究人员通过易错PCR技术引入随机突变,对相应酶基 因进行改造,再进行定向筛选,最终第305位氨基酸替换后,获得活力和稳定性均较高的PanD。该技术与普通PCR类似。已知Mg2+可以提高已发生错配区域的稳定性,Mn2+可以降低DNA聚合酶对底物的专一性。下列说法正确的是( ) A. 该研究运用了蛋白质工程技术直接对酶结构进行...
其实就是把普通PCR做烂了就是易错PCR。加点Mn2+，dNTP什么的浓度提高，造成PCR的时候错误概率提高，然后就这么一路错下去，最后就能得到一堆突变的基因，再从中筛选想要的突变基因。易错
即在易错PCR诱变体系中, Mg2+浓度提高4.7倍, Taq DNA聚合酶提高2倍, 添加Mn2+, 提高5倍的一种或两种d NTP浓度。按以上标准易错PCR体系进行诱变, 可构建无序列倾向性的基因随机点突变库, 每个核苷酸的突变率约为6.6×10-3。 Riedel的研究结果显示, 易错PCR要根据情况选择最佳反应条件。一般增加d ATP和d TTP...
3 讨论 易错 PCR 主要通过调整 Mn2+ 和 Mg2+ 浓度,并 2013年第12期 邵敏等 :基于易错 PCR 技术定向进化枯草芽孢杆菌 β-葡聚糖酶 145 100 䟾⭏䞦 ケਈ䞦1 80 ケਈ䞦2 60 40 20 0 4.0 图8 5.0 6.0 7.0 pH٬ pH 对野生酶和突变酶的酶活力影响 8.0 使用不平衡的 4 种碱基浓度来控制...