明胶酶谱法通过将待测菌株培养在含有明胶的琼脂培养基上,并利用其产生的明胶酶在琼脂中形成透明带区来检测明胶酶活性的存在和水平。明胶酶谱法的具体实验步骤如下: 1. 准备明胶琼脂板:将明胶溶液加入琼脂培养基中,制备明胶琼脂板; 2. 菌株预处理:将待测菌株培养在适当的富含明胶的培养基上; 3. 制备样品:将培养的菌液离心,收集
明胶酶谱法 明胶酶谱法 原理：酶谱法的基本过程是先将样品进行SDS-聚丙烯酰胺（SDS-PAGE，含0.1％明胶）电泳分离，然后在有二价金属离子存在的缓冲 系统中使样品中的MMP-2和MMP-9恢复活性，在各自的迁移位置水解凝胶里的明胶，最后用考马斯亮蓝将凝胶染色，再脱色，在 蓝色背景下可出现白色条带，条带的...
明胶酶谱实验可以检测MMP2和MMP9的活性，是分子生物学的常用实验技术之一。先将样品进行SDS-聚丙烯酰胺（SDS-PAGE，含0.1%明胶）电泳分离，然后在有二价金属离子存在的缓冲系统中使样品中的MMP-2和MMP-9恢复活性，在各自的迁移位置水解凝胶里的明胶，最后用考马斯亮蓝将凝胶染色，再脱色，在蓝色背景下可出现白色条...
1、明胶酶谱法注意事项—制备聚丙烯酰胺凝胶时应注意排除气泡 。 2、明胶酶谱法注意事项—明胶酶谱的活性受钙离子,锌离子,和pH值等因素的影响,因此缓冲液配制应严格准确,尽量用超纯水,孵育温度也掌握好。 3、明胶酶谱法注意事项—用大梳子。 4、明胶酶谱法注意事项—孵育液的pH最好在7.5-7.6,复性的Triton时间...
1、明胶酶谱法凝胶的制备—玻璃板对齐后放入夹中,垂直卡紧,加满水检漏。 2、明胶酶谱法凝胶的制备—配10%分离胶,APS和TEMED作用为促凝,最后灌胶前加。若板不漏水,则将水倒出,并用吸水纸洗净后灌胶,灌至大约3/4处,上面加满水压平。 3、明胶酶谱法凝胶的制备—配浓缩胶,同样地,APS和TEMED最后加,分离胶...
实际操作中,酶谱法通常分为电泳分离与显色反应两个阶段。将样本与含有明胶的聚丙烯酰胺凝胶共同电泳,酶蛋白在电场作用下迁移至对应分子量位置。随后将凝胶置于激活缓冲液中,胶原酶在适宜温度下分解周围明胶,经考马斯亮蓝染色后,酶活性区域会呈现透明条带。这里有两个关键控制点:电泳阶段需使用非还原性条件以保持酶原...
2.明胶酶谱的活性受钙离子,锌离子,和PH值等因素的影响,因此缓冲液配制应严格准确,尽量用超纯水,孵育温度也掌握好。 3.用大梳子 4.孵育液的PH最好在7.5-7.6,复性的TRITON时间长了会有絮状物,所以实验时尽量使用新鲜配置的。 5.孵育的37度不要在CO2培养箱中,因为会改变孵育液的PH值,在普通孵箱即可。 6.明...
明胶酶谱实验可以检测MMP2和MMP9的活性,是分子生物学的常用实验技术之一。 先将样品进行SDS-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE,含0.1%明胶)电泳分离,然后在有二价金属离子存在的缓冲系统中使样品中的MMP-2和MMP-9恢复活性,在各自的迁移位置水解凝胶里的明胶,最后用考马斯亮蓝将凝胶染色,再脱色,在蓝色背景下可出现白色条带,条...
1、明胶酶谱法实验步骤:取对数期的癌细胞在的无血清培养基DMEM中培养24h。 2、明胶酶谱法实验步骤:次日收集上清液,将上清液移入离心管中 2000rpm 离心10min,-70℃储存备用。 3、明胶酶谱法实验步骤:根据细胞计数调整各组细胞培养上清液中的蛋白浓度(或者测定蛋白浓度调整使所上蛋白总量一致)。与5×上样缓冲液混...