不过,若转染多个质粒,其中每个质粒表达一个crRNA,再加上一个Cpf1表达载体,4重编辑的细胞仅为2.4 %。 此外,在最近的一篇Nature Biotechnology文章中,张锋研究组为了解决常用Cpf1:AsCpf1和LbCpf1受限于PAM序列的问题,设计了携带S542R/K607R和S542R/K548...
BV3L6和毛螺科菌Lachnospiraceae bacterium ND2006来源的Cpf1 (下文分别简写为FnCpf1、AsCpf1和LbCpf1) 分别含有1 300、1 307和1 228个氨基酸。第二,Cas9和Cpf1均是单链RNA指导的核酸内切酶,但Cas9只具有DNA内切酶活性,而Cpf1同时具有DNA和RNA内切酶活性。第三,CRISPR/Cas9初级转录产物pre-crRNA的成熟需要反式...
Cpf1系统更简单一些,它只需要一条RNA。Cpf1酶也比标准SpCas9要小,使得它更易于传送至细胞和组织内。 第二:且有可能最重要的是,Cpf1以一种不同于Cas9的方式切割DNA。当Cas9复合物切割DNA时,它切割的是同一位点的两条链,留下的“平端”(blunt ends)在重新连接时往往会发生突变。采用Cpf1复合物生成的两条链...
人类基因组计划的主要领导者之一、Broad研究所所长Eric Lander说:“这一系统有着巨大的潜力推动遗传工程。这篇论文不仅揭示了从前未知的一种CRISPR系统的功能,还证实了可以利用Cpf1完成人类基因组编辑,其具有一些非凡和强大的特性。这一Cpf1系统代表了新一代的基因编辑技术。” CRISPR序列是在1987年第一次被描述出来,...
然而,CRISPR/Cas9也存在细胞毒性,脱靶效应和基因插入困难等一些亟待解决的问题,在一定程度上限制了CRISPR/Cas9的应用.Cpf1是2015年报道的一种新型CRISPR效应蛋白,具有许多与Cas9不同的特性,有利于克服CRISPR/Cas9应用中的一些限制.本文综述了近两年来对CRISPR/Cpf1的研究进展和应用,并对其应用前景和发展方向进行了展望....
第三:Cpf1切口远离识别位点,这意味着即便在切割位点靶基因突变,仍然可以进行再度切割,提供了多次机会来校正编辑。 第四:Cpf1系统为选择靶位点提供了新的灵活性。像Cas9一样,Cpf1复合物必须首选附着PAM,短序列,选择的靶点靠近自然存在的PAM序列。Cpf1系统识别的PAM序列与Cas9截然不同。这在靶向某些基因组如疟原虫及...