以下是敲低基因的一般步骤: 1. 设计:根据目标基因序列,设计相应的RNA干扰分子(如dsRNA、shRNA)、反义RNA或CRISPR-Cas9靶点序列。 2. 转导:将设计好的RNA干扰分子、反义RNA或CRISPR-Cas9系统引入实验生物(如细胞、小鼠等)中。 3. 筛选:对于CRISPR-Cas9或TALENs介导的基因敲低,需要筛选出成功剪切的目标基因突变体...
加入RNAi max,vortex,不离心,静置20min。 7. 准备六孔板细胞:吸掉原培液,加入800ul新培液。 8. 将以上混合液加入六孔板中。 9. 24h后换液,加入2ml 新培液。 10. 再过24h后,先看荧光,若实验组相比对照组荧光减弱,说明RNAi有效果; 11. 收样:加入500ul 1X SDS loading; 12. Western blot进一步确定kno...
加入RNAi max,vortex,不离心,静置20min。 7. 准备六孔板细胞:吸掉原培液,加入800ul新培液。 8. 将以上混合液加入六孔板中。 9. 24h后换液,加入2ml 新培液。 10. 再过24h后,先看荧光,若实验组相比对照组荧光减弱,说明RNAi有效果; 11. 收样:加入500ul 1X SDS loading; 12. Western blot进一步确定kno...