放线菌16S+rDNA+片段扩增方法的优化
16SrDNAPCR扩增和系统进化分析:参照文献[4]的方法提取放线菌基因组DNA,应用细菌16SrDNA通用引物(正向引物:8-27F,反向引物:1429-1445R)进行PCR 扩增。测序所得结果用Blast软件在GenBank/EMBL/DDBJ 等数据库中进行相似性搜索,选取同源性比较高的典型菌株的16SrDNA 序列作为参比对象,用Clustal-X[5]软件进行多重序列...
菌基因组DNA,用16S rDNA 通用引物进行PCR 反 应,并用琼脂糖凝胶电泳检测,并调整菌株DNA 模 板的浓度。 1.4.4 菌株的筛选排重 对上述革兰氏阳性菌进行放线菌特异性引物 PCR 和合成引物 BOX-PCR,结合二者电泳条带结 果排除重复菌株,筛选具有测序价值的菌株。
4)16srdna 序列的 pcr 扩增拮抗菌株的基因组dna 提取后通过进行16srdna 序列 pcr 扩增,增大特异片段的含量并满足测序需要。(1)引物采用由上海生工生物工程技术服务有限 17、公司合成的放线菌通用引物上游引物: f: 5-agagtttgatcctggctag-3下游引物: r: 5-aaggaggtgatccagccgca-3(2)pcr 体系环境本试验中pcr...
扩增用的引物序列为细菌16S rDNA通用引物(27F和1492R),扩增产物为约1500bp的 16S rDNA全长序列。 [0033] PCR反应条件:94cC 5min,94cC Imin,54cC Imin,72cC Imin 30s,72cC 10 min,4 °C保存,30个循环。将PCR产物送至测序公司进行测序,获得16S rDNA序列。
(B)生防菌TRM4554016S rDNA基因的扩增 用放线菌16S rDNA基因通用引物27F(5’-AGAGTTTGATCCTGGCTC-3’)和1492R(5’-CGGCTACCTTGTTACGACTT-3’)扩增放线菌基因组DNA中的16S rDNA基因片段。 25μL的PCR反应体系为:ddH<Sub>2</Sub>O 20.4μL,10×Buffer(缓冲液含Mg<Sup>2+</Sup>)2.5μL,dNTPs0.5μ...
拮抗菌株的基因组DNA提取后通过进行16SrDNA序列PCR扩增,增大特异片段的含 量并满足测序需要。 (1)引物 采用由上海生工生物工程技术服务有限公司合成的放线菌通用引物 上游引物:F: 5′-AGAGTTTGATCCTGGCTAG-3′ 下游引物:R: 5′-AAGGAGGTGATCCAGCCGCA-3′ (2)PCR体系环境 本试验中PCR体系为50µL,其中PCRTaq...
1.2.2 采用 16S rDNA PCR 对具有抗真菌活性菌株进 行分子生物学鉴定 制备具有抗真菌活性的蜚蠊肠 道内生放线菌基因组 DNA,具体方法参照上海生物 工程股份有限公司 Ezup 柱式细菌基因组 DNA 抽取 试剂盒说明书进行.PCR 扩增各菌株 16S rDNA 基 因采用通用引物[8],正向引物 27 f 为 AGA GTT TGA TCC TGG ...
16SrDNA为了解广西北海红树林海洋淤泥中的放线菌资源,采用海水配制高氏培养基分离红树林海洋淤泥中的放线菌样品,从中筛选,分离,提取10株典型放线菌菌株总DNA,用放线菌通用引物对16Sr DNA进行PCR扩增,对获得的扩增结果进行DNA序列测定和对比鉴定.结果表明,10株典型放线菌菌株为2种菌属,其中有8株为链霉菌属(80%)...
不好确定 可以使用细菌的16S基因通用引物扩增一下看看 holyala 还不如把培养的菌落拿来看看... pqw1234 怎么能只通过显微镜看看菌丝就确定呢,放线菌和真菌我都见过不少,我觉得如果是真菌,那周围的就是细菌了。如果是放线菌的菌丝,周围说是孢子也不太像。就还是建议你做个16SRDNA吧,又快又准确, zhuchunhuizh...