固相筛选最为基础，抗原预先固定在固相介质如酶标板、磁珠或纳米颗粒表面，加入噬菌体库后通过多次洗涤去除非特异性结合。这种方法操作简单，适合高通量，但存在抗原固定导致表位遮蔽问题，可能漏掉识别天然构象表位的抗体。比如针对膜蛋白筛选时，固定化可能破坏其三维结构，此时改用细胞膜表面展示抗原更合适。液相筛选针对可溶性抗原设计
1.抗体库构建:首先,需要构建一个包含大量不同抗体的抗体库。常见的方法包括免疫化学方法、获得单个免疫球蛋白B细胞并进行单细胞PCR扩增、切割免疫球蛋白链并进行克隆等。 2.抗原或目标蛋白筛选:抗体库中的抗体会与抗原或目标蛋白发生特异性结合。通常使用抗原或目标蛋白对抗体库进行筛选。抗原或目标蛋白可以是合成的多...
根据ELISA结果,7个抗体均具有中和活性,达到项目预期。 五.进化树 对筛选获得的7个具有中和活性的抗体,进行进化树分析,结果如下: 略 相关服务
酵母展示抗体库筛选技术的优化方向主要包括抗体库构建策略、展示效率提升及筛选方法改进等方面。 3.1 抗体库构建优化 抗体库的多样性对于筛选高亲和力抗体至关重要。近年来,研究人员采用基因改造方法提高抗体库的多样性。例如,利用体外突变和体内重组技术,提高抗体库的变异范围,使酵母抗体库展示更加丰富。 3.2 展示效...
能够直接获得全人源抗体,避免了复杂的人源化工作 图1 噬菌体抗体库筛选流程 该技术最早由George·Smith发明,基本原理是将多肽或蛋白质的基因与丝状噬菌体P3蛋白融合表达,在辅助噬菌体的参与下,展示在噬菌体颗粒表面。将蛋白分子的基因型与表型...
酵母展示抗体库筛选主要依赖于抗体与抗原的特异性结合。在筛选过程中，通常采用流式分选（FACS）技术进行细胞分选。通过荧光标记或其他亲和力标签，能够精确识别出与目标抗原高度特异性结合的抗体。多轮筛选过程能够逐步提高抗体的亲和力和特异性，从而筛选出最优的抗体。三、抗体酵母展示：实现精准筛选与高通量发现 抗体...
图1、抗体库克隆的抗体基因片段(SCFV) 图2、噬菌体展示抗体库构建流程 由于单抗性质的千差万别,抗体库的筛选需要根据不同的单抗制定严格的筛选条件,优化筛选方法,因此抗体库的筛选技术一直处于发展和改进的状态,根据出现时间的先后,主要分为经典筛选法和新型筛选法。 1、经典筛选法 经典筛选法主要包括固相筛选法和液...
目前临床应用的抗流感抗体多靶向血凝素(HA)保守区域,但存在广谱性不足或亲和力低等问题。基于噬菌体展示技术的人源抗体库筛选策略,可直接从天然免疫库中挖掘高活性抗体,具有高效、多样化的优势。通过构建大容量人源Fab抗体库(>1×10^9),结合多轮生物淘选技术,筛选出靶向HA蛋白的广谱中和抗体,并系统评估其结合特性...
FACS具有高通量、高灵敏度、高特异性等优点,适用于筛选高亲和力的单克隆抗体。 3. 质粒显示技术(Phage Display) 质粒显示技术是一种利用噬菌体表面展示抗体库的方法。在质粒显示技术中,将抗体基因插入噬菌体基因组中,使噬菌体表面展示抗体库,加入待测抗原,经过洗涤后,筛选出与抗原结合的抗体。质粒显示技术具有高通量...
体内筛选是指将噬菌体展示文库静脉注射到动物体内,因为血管分子内皮的异质性,噬菌体可以有选择性的导向不同组织,这样就可以得到与不同组织特异结合的噬菌体展示抗体;体外筛选的方法有生物淘洗法、竞争法、消减法、选择性感染筛选、延迟性感染筛选等方法。其中生物淘洗法最为常用。本文主要对生物淘洗法筛选噬菌体抗体库...