(1)RT-PCR是指以病毒的RNA为模板通过______ 过程合成cDNA,并对cDNA进行PCR扩增的过程。进行RT-PCR过程中,需要加入的酶有_________。 (2)利用RT-PCR试剂盒对新型冠状病毒进行检测时,除借助上述RT-PCR技术外,还需要有特异性探针。制作该探针的依据是_____________。 (3)除核酸检测外,研究
解析:(1)以RNA为模板合成cDNA的过程为逆转录,该过程需要逆转录酶的参与;利用PCR技术对cDNA进行扩增时需要耐高温的DNA聚合酶参与。(2)探针是指被放射性同位素标记或荧光标记的一段单链核酸,因此制作该探针的依据是新型冠状病毒的核苷酸序列;利用该探针对新型冠状病毒进行检测的原理是分子杂交。(3)题述方案制备的是单...
目的:扩增人fg12凝血酶原酶纤维蛋白原相关结构域(FRED)cDNA,构建原核表达质粒。方法:从外周血单核细胞(PBMNC)中提取细胞总RNA后,应用RT-PCR方法扩增fg12凝血酶原酶FRED段cDNA,酶切后与pET22b(+)原核表达载体连接,然后经酶切和测序鉴定。结果:从PBMNC中扩增了727bp长的PCR产物,构建的重组原核表达质粒经酶切和...
采用PCR 技术,以山羊肝脏cDNA 为模板经扩增得到钙激活酶激活蛋白(ca l pa i n activator)基因,并进行了序列测定。该片段长1017bp ,5 端非翻译区长39bp ,3 端非翻译区长567bp 。编码区长411bp ,编码一个长137个氨基酸残基的蛋白质,其理论分子量为14298D a 。与Edon M e llon i 等(1998)报道的从...
反转录酶作用下合成 cDNA 第一链 . 1. 2. 3 PCR 扩增 我们根据已报导的 ACC 氧化酶 cDNA[7 ] 核苷酸序列合成 5′ 端特异引物 ,其核苷酸序列为 μ 5′ G AG AACTTCCCAATCATCAACTT 3′ ,在第一步 PCR 反应中 :100 μ L 反应体系中加 10 ×PCR 反应缓冲液 10 L, μ MgCl2 (25 mmol L - ...
解析:(1)新冠病毒的核酸是RNA,利用PCR扩增前,需要在逆转录酶作用下使RNA形成cDNA,需要的原料是四种游离的脱氧核苷酸。 (2)引物的作用是使DNA聚合酶能够从引物的3'端开始连接脱氧核苷酸,引物长度通常为20~30个核苷酸,过短会导致特异性差,得不到所需要的目的基因片段。 (3)PCR反应需要在一定的缓冲溶液中才能进行...
下面为形成cDNA的过程和PCR扩增过程示意图。 请根据图解回答下列问题:RNA链DAN链①核酸酶H2RNA单链杂交双链单链DNA双链DNA③90-95℃④55-60℃(1)催化①过程的酶是(2)③过程也称为DNA的变性,此过程在温度高达90~95C时才能完成,说明DNA分子具有性。(3)由图中信息分析可知,催化②⑤过程的酶都是 ,两者在...
为了得到葡萄白藜芦醇合酶(RS)基因的cDNA,实验以葡萄叶片为材料,利用引物悬挂延伸 PCR法,以葡萄总DNA为模板,先分别扩增得到编码白藜芦醇合酶的第一外显子和第二外显子的序列,再以这两个序列为模板,进行第二轮的PCR,得到大小 与RS基因大小相同的片段,经PCR产物测序证明,两个外显子已经准确无误地拼接,此片段就是...
一步PCR法快速扩增辽宁碱蓬胆碱单加氧酶cDNA3′末端序列 维普资讯 http://www.cqvip.com
(8分)RT- PCR是将RNA逆转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增反相结合的技术,具体过程如下图所示:(1)过程Ⅰ需要加入缓冲液、原料、 ▲ 、 ▲ 和引物A。(2)过程Ⅱ首先要将反体系的温度升高到95℃,其目的是 ▲ ,该反体系中所用的Taq酶至少能耐受 ▲ ℃ 。(3)过程Ⅱ拟对单链cDNA进行n次循环的扩增,理论上...