TransNGS®Single Cell Full Length cDNA Synthesis&Amplification Kit是一款能够获得单细胞全长cDNA扩增产物的试剂盒,适用于1-500个细胞或10 pg-10 ng总RNA的全长cDNA的扩增建库。该试剂盒以Single Cell Oligo(dT)为逆转录引物,并应用合成效率高、且具有模板置换活性的逆转录
★建议RACE扩增产物不超过2 kb,尤其是对于较长(>10 kb)或表达量较低的转录本,GSP尽量靠近cDNA末端。 ★当同一转录本有多条GSP时,可以选择更靠近cDNA末端的GSP为NGSP(巢式GSP)。若扩增效果仍然欠佳,则让NGSP的5' 末端与GSP的3' 末端有~10 nt的重叠,以提高二轮巢式扩增时的特异性。 ★设计完成的GSP/NGSP经...
如果目标是表达该基因，那么只需扩增CDS区即可。若想要扩增全序列，则需要在引物设计时特别注意前后端的选择。然而，基因的3'端通常是Poly T序列，这意味着在进行逆转录时需要添加一个适配器，以便能够完整地扩增出目标序列。这个过程相对来说较为复杂。全长基因序列较长，因此在设计引物时，必须考虑到PC...
图二 稀有转录本和长转录本的扩增结果 3.5μg Hela总RNA经GeneRacer™步骤处理,利用GeneRacer™的Oligo dT引物和SuperScriptⅡ™得到cDNA,然后使用GeneRacer™ 5’引物和基因特异性的引物PCR扩增。基因经过30-35个循环的一轮PCR扩增。50μl PCR扩增产物中的15μl在1.2%E-Gel®琼脂糖凝胶电泳检测,在紫外光下...
乙脑病毒全长cdna的扩增克隆，需依据病毒基因组序列设计特异性引物，引物的Tm值通常在55℃ - 65℃之间，以保证扩增的准确性与高效性，这是后续制备感染性rna的关键起始步骤。在体外转录制备感染性rna过程中，转录体系的镁离子浓度很关键，一般维持在2 - 4 mM，合适的镁离子浓度能增强RNA聚合酶的活性，确保转录顺利...
解析 如果是要表达该基因的话把CDS区扩增出来就可以了 想扩增全场的话只能引物设计在前后端了 不过后面是Poly T,所以估计反转录的时候得加一个adapter 这样才能扩增完整的出来 还是比较麻烦的 而且全长的话太长了 要用高保真的酶 很容易出现错配和突变
解析 赾ds两端设计引物,你没有说清多长,如果2000bp还可以用一般tap酶扩增,如果太长了可以选在更强一些酶,也可以吧cds分成不同片段,设计多组重叠引物扩增出不同的片段在拼接. 结果一 题目 未知基因扩增其cDNA全长引物应该怎么设计? 答案 赾ds两端设计引物,你没有说清多长,如果2000bp还可以用一般tap酶扩增,...
利用RACE(利用PCR技术快速扩增全长mRNA)技术构建全长cDNA文库是传统C库构建技术的改进。本实验即是利用寡核苷酸帽法,进行全长C库的构建,从而掌握RACE技术的原理与基本操作方法。 实验原理 其原理是利用真核mRNA的3’poly(A)和5’帽子结构作为标签,用通用引物识别并配对标签序列,PCR扩增后克隆PCR产物,从而构建出全长...
RACE技术，全称为cDNA全长扩增快速扩增策略，是生物学研究中常用的技术，用于获取特定基因cDNA的全长或部分序列，特别是起始和结束序列，以深入了解RNA分子特性。该技术基于PCR技术，通过反向转录和PCR步骤实现目标。首先，需要准备特定的cDNA模板，通过添加适配序列作为PCR引物的锚点，以便扩增未知序列。RACE主要...
那就可以直接选取两头约20bp的片段设计互补引物。如果基因太长了，那就设计多段引物，一段一段把基因pcr出来再连在一起。如果你要扩增的是cDNA的话，也就是蛋白质的cDNA序列的话，就去ncbi－gene里面找到相应蛋白质的序列，再设计引物，以cDNA文库位模版把目标基因给pcr出来。