常用的第三代慢病毒包装系统质粒有pLP/VSVG（包膜质粒）、pLP1（包装质粒）、pLP2（包装质粒）搭配常用骨架质粒构成四质粒系统使用。第三代慢病毒的转移质粒兼容第二代的三质粒包装系统。慢病毒载体的特点 宿主范围广: 可感染分裂细胞、非分裂细胞; 能有效感染原代细胞、神经元细胞、干细胞、心肌细胞、肝细胞、肿瘤...
转移质粒,将组成型启动子构建在目的基因上游的LTR序列中,同时删除了部分3' LTR序列,破坏了LTR的启动子/增强子活性,这样病毒插入到基因组后会自我失活(self-inactivating,SIN),从而进一步提高了安全性。删除了部分5' LTR序列,与异源启动子/增强子融合,如CMV、RSV。 常用的第三代慢病毒包装系统质粒有pLP/VSVG(包膜...
以水疱性口炎病毒表面糖蛋白(Vesicular stomatitis virus surface glycoprotein,VSVG)为包膜的慢病毒载体介导基因治疗不会导致轴突末端向大脑其他部位逆行转移,而AAV有超过12种不同的血清型,在不同物种中有不同的表达模式,这对解释临床前模型动物实验的结果有负面影响。 实验表明,LV具有更强的转导神经系统终末分化细胞...
慢病毒(Lentivirus)载体是以HIV-1病毒为基础发展起来的基因研究载体,与传统的逆转录病毒载体相比,慢病毒载体具有在分裂和非分裂细胞中感染的能力。 实验平台的慢病毒系统属于第三代慢病毒系统,具有高生物安全性,采用VSVG包膜,宿主范围广泛,病毒滴度高,达到10^9TU/mL。 目前的慢病毒载体提供多种启动子选项,如CMV、m...
重组慢病毒载体是以HIV- 1(人类免疫缺陷I 型病毒)为基础,使用疱疹病毒VSVG外壳蛋白发展起来的工具载体。 第一代基于 HIV-1 的慢病毒载体将载体组分分成三个质粒以增加安全性: 包装质粒,编码病毒糖蛋白的 Env 质粒(包膜质粒)和转移质粒。 利用基因工程手段特异性删除包装质粒的包装信号或 LTRs 以减少载体制剂中 ...
psPAX2载体含有gag基因,编码病毒主要的结构蛋白;pol基因,编码病毒特异性的酶;rev基因,编码调节gag和pol基因表达的调节因子。pMD2G载体中含有vsvg基因,提供病毒包装所需要的包膜蛋白。通过转染试剂将上述三质粒共转染到包装细胞293T中,转录出的目的基因RNA与psPAX2、pMD2G基因翻译出的蛋白可组装成为慢病毒。
2. 利用VSVG包膜蛋白增加慢病毒载体的宿主范围由于HIV-1病毒的env蛋白只能识别CD4受体，早期的HIV载体所能感染的宿主范围非常狭窄。VSV-G蛋白来源于水疱疹病毒，最开始被利用于改造MLV。通过用VSV-G蛋白取代MLV的env蛋白将获得两个明显的优势：（1）VSV-G蛋白比逆转录病毒或者慢病毒的env蛋白更加稳定，因此通过VS...
2. 利用VSVG包膜蛋白增加慢病毒载体的宿主范围 由于HIV-1病毒的env蛋白只能识别CD4受体,早期的HIV载体所能感染的宿主范围非常狭窄。VSV-G蛋白来源于水疱疹病毒,最开始被利用于改造MLV。 通过用VSV-G蛋白取代MLV的env蛋白将获得两个明显的优势:(1)VSV-G蛋白比逆转录病毒或者慢病毒的env蛋白更加稳定,因此通过VSV...
通过将反式作用因子置于VSVG质粒上,Naldini将病毒蛋白表达所需的顺式元件和反式因子分开表达,提高慢病毒使用中的安全性。此外他敲除了病毒复制辅助基因vpu,改用CMV启动子起始病毒蛋白组份的转录,并在3'LTR端加入Poly A序列,报告基因也改用了β-半乳糖苷酶(lacZ)。生产病毒使用的宿主细胞改为整合了SV40病毒大T...
慢病毒载体系统由pGCSIL-GFP载体、pHelperl.0(gag/pol元件)载体、pHelper2.0(VSVG元件)载体三质粒组成,其中pGCSIL-GFP载体含有能持续表达小RNA的元件,同时能表达荧光蛋白GFP,pHelperl.0和pHelper2.0含有病毒包装所必需的元件。 pGCSIL-GFP 质粒图谱 pHelperl.0 质粒图谱 ...