此外,每个载体批次还必须根据几个安全参数进行评估,主要分析重组有能力的慢病毒(RCL)、内毒素、支原体、外来因子和无菌性。像pH值、渗透压和外观这样的物理化学参数补充了产品表征。 图2. 用于体外或体内治疗的慢病毒载体的通用纯化方案。每一步中消除的杂质和过程中添加的元素也在图中表示。 表3. 用于LV制剂质量...
慢病毒纯化工艺,依据其纯化原理主要分为超速离心、密度梯度离心、PEG离心、超滤、切向流、离子交换层析等方法。当前主要的慢病毒纯化均是有以上方法的一种或几种方法组合在一起完成。 对于大部分的细胞感染以及普通的动物实验来说我们推荐超速离心方法对慢病毒进行浓缩。超滤过程中留下的细胞碎片会导致细胞毒性,直接影响...
1.将含有慢病毒颗粒的培养基从平板转移到无菌容器中,并以300×g离心培养基10分钟以除去细胞碎片。 2.通过0.45μm过滤器过滤上清液。 3.将过滤的上清液转移到无菌容器中,并向每4体积的含有慢病毒的上清液中加入1体积的冷的慢病毒沉淀溶液(4℃)。(实施例:5ml慢病毒沉淀溶液,含20ml病毒上清液)。 4.充分混合并冷藏...
1)将慢病毒收获液进行过滤和核酸酶孵育,得到慢病毒载体澄清收获液; 2)对所述慢病毒载体澄清收获液采用阴离子交换层析和/或复合模式层析处理,获得纯化的慢病毒载体样品。 2.根据权利要求1所述的一种慢病毒载体纯化方法,其特征在于:所述步骤1)中采用深层过滤膜或孔径为0.45um-1um的死端过滤膜包过滤所述慢病毒收获...
本发明提供一种包含阳离子层析的慢病毒载体纯化方法,对慢病毒载体溶液进行阳离子交换层析处理,基于该阳离子交换层析建立的慢病毒载体纯化方法,其对载体收获液进行纯化的结果表明,加入该步骤的纯化方法病毒滴度回收率高,宿主蛋白和核酸去除率高,并有利于其他工艺杂质的进一步去除。该纯化技术不仅适用于实验室研发,同时可进...
一种慢病毒的纯化方法 (57)摘要 本发明提供了一种慢病毒的纯化方法,其包括以下步骤:步骤S1,病毒培养;步骤S2,病毒纯化预处理;将扩增得到的慢病毒进行离心分离,收集上清液为病毒收获液;先对病毒收获液进行第一次过滤处理,将过滤得到的病毒液经过第二次过滤处理,收集病毒滤过液进行超滤浓缩后离心,收集上清液,再进行第...
一种BaEV包膜假型慢病毒的纯化方法专利信息由爱企查专利频道提供,一种BaEV包膜假型慢病毒的纯化方法说明:本发明属于生物技术领域,具体涉及一种BaEV包膜假型慢病毒的纯化方法。该纯化方法包括如下步骤:(1)...专利查询请上爱企查
步骤:步骤1:浓缩BaEV包膜假型慢病毒澄清液,离心,弃上清,得到慢病毒沉淀;步骤2:将慢病毒沉淀用缓冲液重悬,加入全能核酸酶酶切,得到粗纯样品;步骤3:将粗纯样品经层析纯化,得到精纯样品;所述层析为MustangQXT膜层析囊式滤器层析或DEAE纤维素层析;步骤4:将精纯样品进行洗滤浓缩,除菌,得到纯化后的BaEV包膜假型慢病毒...
重组mIL13慢病毒悬浮无血清稳定细胞株的构建及蛋白纯化方法.pdf,本发明涉及生物医学领域,具体涉及一种重组mIL13慢病毒悬浮无血清稳定细胞株的构建方法,该方法首先是将mIL13基因插入pLVX‑AcGFP1‑N1慢病毒转移载体质粒中构建得到mIL13重组慢病毒转移载体质粒,然后将
一种新型慢病毒载体制备体系的初步建立 方法,优化系统产量,Real-timePCR方法测定细胞培养上清中病毒载体的拷贝数,利用流式细胞术检测病毒载体滴度.RT-PCR及p24免疫印迹结果均提示在细胞上清中存在慢病毒载体... 马强,李明,董文其,... - 《生物化学与生物物理进展》 被引量: 12发表: 2007年 广西三个地方猪种p...