在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞,从而达到良好的的基因治疗效果。对于一些较难转染的细胞,如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等,使用慢病毒载体,能大大提高目的基因或目的shRNA的转导效率,且目的基因或目的shRNA整合到宿主细胞基因组的几率大大...
慢病毒感染细胞实验原理与实⽤流程(⼀)⾸先,包装病毒有很多种,常见的有慢病毒和腺病毒:慢病毒(Lentivirus)是逆转录病毒的⼀种。可⽤于感染依靠传统转染试剂瞬转,难于转染的细 胞系,如原代细胞、悬浮细胞和处于⾮分裂状态的细胞,并且在感染后可以整合到受感染细胞 的基因组,进⾏长时间的稳定...
第一代慢病毒载体为双质粒系统,基本保留了HIV的所有组件,产毒滴度低,复制缺陷,且存在产生复制能力的活性HIV病毒的可能;第二代慢病毒载体为三质粒系统,分为包装质粒、包膜质粒和载体质粒,其中使用水泡性口炎病毒糖蛋白(VSV-G)基因替代env基因,拓宽了病毒的感染宿主细胞范围,虽然三质粒降低了病毒重组的可能,但是由于其...
次日进行慢病毒感染,此时细胞的融合度约为70%左右。 (2)准备病毒:取出4℃保存的病毒,使用瞬时离心机离心20秒(使病毒完全悬于离心管底部即可);如果是冻存在-80℃的病毒需要先在冰上融化后使用。根据实验按照MOI准确计算慢病毒用量,将其稀释到培养基中,并尽可能保证所获得的含有慢病毒的培养基的总体积为最小体积,...
1. 实验原理 慢病毒载体可以将外源基因或外源的shRNA有效地整合到宿主染色体上,从而达到持久性表达目的序列的效果。在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞,从而达到良好的的基因治疗效果。对于一些较难转染的细胞,如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等,...
1. 实验原理 慢病毒载体可以将外源基因或外源的shRNA有效地整合到宿主染色体上,从而达到持久性表达目的序列的效果。在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞,从而达到良好的的基因治疗效果。对于一些较难转染的细胞,如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等,...
病毒表达系统 慢病毒表达系统 腺病毒表达系统 病毒基因组 RNA病毒 双链DNA病毒 复制 自主复制 自主复制 是否整合 病毒基因组整合于宿主基因组,长时间、稳定表达外源基因 病毒基因组游离于宿主基因组外,瞬时表达外源基因 感染细胞类型 感染分裂和不分裂细胞,适用于难转染的原代细胞(如神经细胞)及体内实验 感染分裂和不...
1. 实验原理 慢病毒载体可以将外源基因或外源的shRNA有效地整合到宿主染色体上,从而达到持久性表达目的序列的效果。在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞,从而达到良好的的基因治疗效果。对于一些较难转染的细胞,如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等,...
慢病毒载体感染能力强、且宿主广泛(分裂和非分裂细胞);能够整合进宿主DNA且筛选后稳定遗传;表达潜伏期短,一般细胞24h-48h、体内96小时可表达;慢病毒载体可以插入组织特异性启动子或增强子;慢病毒携带基因的长度大致无5kb以内。由于慢病毒依然是HIV来源,自然宿主是人,依然存在潜在的生物毒性,故操作时避免直接接触人体。