第3个质粒:转移质粒(Transfer Plasmid),含有病毒的LTRs和Ψ包装信号(图片未画出),除非有内部启动子,否则这个Transfer Plasmid的目的序列是由5'LTR驱动的,它是一个弱启动子,需要Tat元件激活。所有的第2代慢病毒Transfer Plasmid必须要用第2代慢病毒包装系统,因为它的LTR是Tat依赖性的。而第3代慢病毒包装系统不能包...
四、慢病毒包装的实验步骤（1）构建含有目的基因的慢病毒载体。（2）大量扩增慢病毒载体：根据实验将包装慢病毒过程中需要用到的3个质粒进行高纯度无内毒素抽提。（3）293T细胞内进行慢病毒载体的大量包装：按一定比例将转移质粒、包装质粒和包膜质粒共转染指数生长期的293T细胞。（4）慢病毒的浓缩及纯化：PEG8000浓...
1)1个编码目的基因的慢病毒转移质粒。目的基因两侧各有一个LTR(Iong terminal repeat)序列,LTR序列促使目的基因整合到目的细胞基因组里。为了提高安全性能,转移质粒的3' LTR缺失了部分序列,使得整合后的病毒基因组失去自我复制能力。 2)2个包装质粒。其中一个质粒编码Rev,另外一个质粒编码Gag和Pol。 3)1个编码VSV...
慢病毒，因其感染过程的慢性特性，被称为Lentivirus，包括HIV-1、HIV-2、FIV、SIV和BIV等。其基因组为双链RNA，区别于一般逆转录病毒，其感染性广泛，能侵染分裂和非分裂细胞。慢病毒载体，如HIV-1，是通过剔除毒性基因并替换以外源目的基因而形成的假型病毒，用于基因敲除、过表达和RNA干扰等研究。HIV...